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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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beautybanana

木虫 (著名写手)

一般是引物设计没有问题,RNA模板质量尚可,反转录都是可以的
11楼2012-04-24 22:33:49
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-25 13:56:30
RNA质量没问题反转录都不会有问题的
1)按照你所说你前面不消化DNA的能扩出来,而消化过的反而扩不出来的情况可以认为你的引物是没有问题的;
2)不知道你1-9号孔是不是所有的模板都一样的浓度,如果不一样考虑一下模板弄度的问题,如果一样那应该是模板的问题,重新再做一次吧
12楼2012-04-25 13:19:58
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weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by syn1985 at 2012-04-25 13:19:58:
RNA质量没问题反转录都不会有问题的
1)按照你所说你前面不消化DNA的能扩出来,而消化过的反而扩不出来的情况可以认为你的引物是没有问题的;
2)不知道你1-9号孔是不是所有的模板都一样的浓度,如果不一样考虑一 ...

谢谢回复。。。
13楼2012-04-25 14:33:04
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weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-04-24 21:02:01:
我是做动物的,不知道植物的,但是,首先,你要确定你的RNA反转的好不好,先做个内参,跑个25-30CYCLE
要是觉得提的RNA不好,可以跑个电泳看看
你加酶消化的时候,处理的东西包括水,都是无RNase的吧?
再说说 ...

首先谢谢您的回复。消化的时候都是试剂盒里的,但里面没有Rnase inhibitor,我也没有单独加。。。
14楼2012-04-25 14:38:39
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xumin-0120

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流! 2012-05-08 18:59:38
怎么说,首先确定你的引物扩增的序列中间有没有内含子序列,没有的话,你的RNA为模版的1号就有你所要的目的片段,如果中间没有多余内含子序列,极可能是DNA。看你的RNA电泳图效果挺好的,反转录后问题也不是很大。可能是你的引物不够特异,还是先找个内参对比下比较可靠~~动物的一般是actin,植物的就不知道了。。。。
15楼2012-05-08 16:37:44
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