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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » rt-pcr电泳图，求好心虫友帮助分析一下，跪谢。。。
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beautybanana

木虫 (著名写手)
一般是引物设计没有问题，RNA模板质量尚可，反转录都是可以的
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11楼2012-04-24 22:33:49
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-25 13:56:30
RNA质量没问题反转录都不会有问题的
1)按照你所说你前面不消化DNA的能扩出来，而消化过的反而扩不出来的情况可以认为你的引物是没有问题的；
2）不知道你1-9号孔是不是所有的模板都一样的浓度，如果不一样考虑一下模板弄度的问题，如果一样那应该是模板的问题，重新再做一次吧
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12楼2012-04-25 13:19:58
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weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by syn1985 at 2012-04-25 13:19:58:
RNA质量没问题反转录都不会有问题的
1)按照你所说你前面不消化DNA的能扩出来，而消化过的反而扩不出来的情况可以认为你的引物是没有问题的；
2）不知道你1-9号孔是不是所有的模板都一样的浓度，如果不一样考虑一 ...

谢谢回复。。。
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13楼2012-04-25 14:33:04
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weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-04-24 21:02:01:
我是做动物的，不知道植物的，但是，首先，你要确定你的RNA反转的好不好，先做个内参，跑个25-30CYCLE
要是觉得提的RNA不好，可以跑个电泳看看
你加酶消化的时候，处理的东西包括水，都是无RNase的吧？
再说说 ...

首先谢谢您的回复。消化的时候都是试剂盒里的，但里面没有Rnase inhibitor，我也没有单独加。。。
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14楼2012-04-25 14:38:39
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xumin-0120

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-05-08 18:59:38
怎么说，首先确定你的引物扩增的序列中间有没有内含子序列，没有的话，你的RNA为模版的1号就有你所要的目的片段，如果中间没有多余内含子序列，极可能是DNA。看你的RNA电泳图效果挺好的，反转录后问题也不是很大。可能是你的引物不够特异，还是先找个内参对比下比较可靠~~动物的一般是actin，植物的就不知道了。。。。
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15楼2012-05-08 16:37:44
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