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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 提取
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hbpxh

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA 提取

大家好，我昨天做了大鼠心脏的总RNA 提取，在测紫外时A260只有0.02左右。而且A260/A280达到2.2了。以前提取肝脏时，同样的操作A260都是大于0.1的，有没有哪位遇到过类似的情况或知道原因是什么，3Q
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1楼 2012-04-19 10:35:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hbpxh: 金币+10 2012-04-19 22:21:18
A260/A280只能大概反应你提取产物的纯度，A260反应你提取产物的浓度，一般用紫外分光光度计测定RNA浓度，用电泳检测RNA的完整性和纯度。假如电泳结果显示有很严重的基因组或者蛋白质污染，那个紫外分光光度计测的浓度也就没意义了。紫外测浓度和电泳测纯度和完整性这两个最好都做一下。浓度低有很多原因的：组织量过大而加入的TRIzol量不够，虽然你组织很多，但有效裂解的并不多；操作时间耗费太多，RNA会严重降解；提取RNA所使用的耗材被RNAse污染会导致降解；在加入氯仿离心之后吸取上清为了保证不吸到中间层而损失太多上清；RNA量很多，但溶解时加入的DEPC处理水太少，导致部分RNA没有溶解。
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4楼2012-04-19 16:35:37
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普通回帖

cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前我也测过，我觉得是蛋白质没去除干净吧，有一次我测数据读不出来，很郁闷，但我想了一下把水多加了一些，数据就出来了，我觉得如果你的蛋白质去除不干净，就可能造成这种结果，你可以研究一下再，仅供参考啊
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我努力我奋斗我成功
2楼2012-04-19 15:51:00
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-20 23:05:49
嗯...........
A260过低但对A280比值高，并不是蛋白的问题吧，可能是研磨或匀浆化不完全造成了产量过低，同时还可能伴有一定程度的降解，建议跑电泳检测一下哦
个人经验 若有说错请高手指点哦
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Let God do with it as He wills
3楼2012-04-19 16:23:30
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 专家考核, 辛苦！ 2012-04-20 23:06:15
吸光度值只能作为参考，楼主还是跑胶吧，楼上的已经回答的很清楚了
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5楼2012-04-19 17:20:16
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seahow

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-20 23:06:25
很显然是浓度过低，因此比值过高是不可信的；还谈不到蛋白污染问题； 我倒觉得很可能是试剂污染，在260吸收峰很高的，呵呵。

所以，没有浓度，比值是没有意义的。
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6楼2012-04-19 17:26:45
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hbpxh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-19 15:51:00:
以前我也测过，我觉得是蛋白质没去除干净吧，有一次我测数据读不出来，很郁闷，但我想了一下把水多加了一些，数据就出来了，我觉得如果你的蛋白质去除不干净，就可能造成这种结果，你可以研究一下再，仅供参考啊

谢谢
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7楼2012-04-19 22:13:25
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hbpxh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by seahow at 2012-04-19 17:26:45:
很显然是浓度过低，因此比值过高是不可信的；还谈不到蛋白污染问题； 我倒觉得很可能是试剂污染，在260吸收峰很高的，呵呵。

所以，没有浓度，比值是没有意义的。

今天又做了一次，结果还是不好，郁闷
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8楼2012-04-19 22:17:43
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wansanlian

金虫 (小有名气)
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-20 23:06:04
你有跑电泳看了吗?要看到有出来RNA的话,这些比值才有意义啊,如果没有提出来RNA这些都是没有用的呢.有的时候虽然提出来260的值低,但是可以跑出来就行了
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乱花渐欲迷人眼
9楼2012-04-20 00:20:23
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)
跑电泳吧，又不麻烦，而且是最有说服力的证据，如果条带正确，继续下一步就没有问题。
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10楼2012-04-20 09:49:06
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