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RNA 提取
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| 大家好，我昨天做了大鼠心脏的总RNA 提取，在测紫外时A260只有0.02左右。而且A260/A280达到2.2了。以前提取肝脏时，同样的操作A260都是大于0.1的，有没有哪位遇到过类似的情况或知道原因是什么，3Q |
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 分子生物 |
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【答案】应助回帖
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hbpxh: 金币+10 2012-04-19 22:21:18
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hbpxh: 金币+10 2012-04-19 22:21:18
| A260/A280只能大概反应你提取产物的纯度，A260反应你提取产物的浓度，一般用紫外分光光度计测定RNA浓度，用电泳检测RNA的完整性和纯度。假如电泳结果显示有很严重的基因组或者蛋白质污染，那个紫外分光光度计测的浓度也就没意义了。紫外测浓度和电泳测纯度和完整性这两个最好都做一下。浓度低有很多原因的：组织量过大而加入的TRIzol量不够，虽然你组织很多，但有效裂解的并不多；操作时间耗费太多，RNA会严重降解；提取RNA所使用的耗材被RNAse污染会导致降解；在加入氯仿离心之后吸取上清为了保证不吸到中间层而损失太多上清；RNA量很多，但溶解时加入的DEPC处理水太少，导致部分RNA没有溶解。 |
4楼2012-04-19 16:35:37
