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thestormcong

银虫 (小有名气)

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[求助] 二次pcr产物

大家好，现在在做red基因敲除。最近在准备打靶片段。我的第一轮pcr产物切胶回收，dpnI酶切，再次切胶回收。本来是用来打靶的，可是电泳后发现亮度不够。于是就想以该产物为模板，进行二次pcr，可是二次pcr后没有发现目的条带，纠结。
图一：第一道为打靶片段（切胶回收，酶切，再次切胶回收，上样量2ul）中间道为宿主里的pkd46质粒（我加大了提取量），第三道marker，从下往上marker分别为750,1000,2000bp。marker的浓度为50ng/5ul（我上样5ul）。大家觉得我这样的浓度可行吗？如果不行的话我就要重做一次
图二：二次pcr产物后的条带，marker最下方两条为200，100bp。
战友们有没有得到高浓度打靶片段的方法，我现在的想法是想以打靶片段为模板进行二次pcr，因为这样会节省一点dpnI，dpnI好像一根用不了几次。
可是二次pcr得不到产物了。纠结。。。。。
大家给点建议吧，先行谢过啊！

图一

图二

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