| 查看: 912 | 回复: 2 | |||
thestormcong银虫 (小有名气)
|
[求助]
二次pcr产物
|
|
大家好，现在在做red基因敲除。最近在准备打靶片段。我的第一轮pcr产物切胶回收，dpnI酶切，再次切胶回收。本来是用来打靶的，可是电泳后发现亮度不够。于是就想以该产物为模板，进行二次pcr，可是二次pcr后没有发现目的条带，纠结。 图一：第一道为打靶片段（切胶回收，酶切，再次切胶回收，上样量2ul） 中间道为宿主里的pkd46质粒（我加大了提取量），第三道marker，从下往上marker分别为750,1000,2000bp。marker的浓度为50ng/5ul（我上样5ul）。大家觉得我这样的浓度可行吗？如果不行的话我就要重做一次 图二：二次pcr产物后的条带，marker最下方两条为200，100bp。 战友们有没有得到高浓度打靶片段的方法，我现在的想法是想以打靶片段为模板进行二次pcr，因为这样会节省一点dpnI，dpnI好像一根用不了几次。 可是二次pcr得不到产物了。纠结。。。。。 大家给点建议吧，先行谢过啊！  图一  图二 |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有157人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
thestormcong
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 462.1
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 109.2小时
- 虫号: 1410070
- 注册: 2011-09-20
- 专业: 生物化学
2楼2012-04-12 12:15:05
cheng_xiao
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 3645.2
- 帖子: 273
- 在线: 62.7小时
- 虫号: 1553648
- 注册: 2011-12-27
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
3楼2012-04-12 14:10:22
10