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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 谁做过乙醇沉淀法浓缩DNA呀？离心之后能用肉眼看到DNA吗？
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 谁做过乙醇沉淀法浓缩DNA呀？离心之后能用肉眼看到DNA吗？

谁做过乙醇沉淀法浓缩DNA呀？离心之后能用肉眼看到DNA吗？
我是用琼脂糖凝胶回收试剂盒回收之后的PCR产物，用乙醇沉淀法浓缩DNA，离心之后看不到有DNA沉淀，这咋办呀？是本来就看不到还是没沉淀下来？有做过的虫子给俺个建议呀
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好孩子！
1楼 2012-04-07 21:42:40
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, ★有帮助 2012-04-08 09:56:08
做过这方面实验，提供一点我的经验：如果量少的话是看不见的，但是乙醇沉淀（最好加盐助沉）确实可以沉淀DNA，不用担心沉淀不下来。另外离心时离心管最好都要有一个固定的放置方式，这样离心完后虽然看不见但可以知道沉淀在什么位置，从而可以避免用枪吸出乙醇时同时也将DNA吸走~~~
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6楼2012-04-08 08:01:54
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xmuring

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, ★有帮助, 感谢回帖，我就是胶回收的，但是需要极大的浓缩，所以问乙醇沉淀的问题呀 2012-04-07 22:11:08
我做过乙醇沉淀法浓缩DNA，但不是胶回收之后的，DNA沉淀一般是在管底的一层透明的东西，对着灯光看能看出来跟离心管的折射率不一样。
话说你回收PCR产物为什么不直接用PCR产物回收试剂盒呢？我用过胶回收试剂盒，回收率特别特别低，不知道是不是操作原因。。。
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2楼2012-04-07 22:04:12
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mjzjily

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, ★有帮助, 多谢多谢呀，我加乙酸铵也可以吧？ 2012-04-08 09:29:39
首先，乙醇沉淀DNA是需要盐离子的。所以只加乙醇效果不一定会好。用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷，DNA才能沉淀。一般可以采用钠离子。
此外，如果浓缩倍数不是很大的话，或许在胶回收操作时，减少洗脱液的用量，也能提高浓度。
祝实验顺利哈~~~
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扎实科研
3楼2012-04-07 22:34:48
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, ★有帮助 2012-04-08 09:55:55
这要看你DNA的量，一般PCR产物用酒精沉淀的话应该能看到的
方法：PCR产物+2.5倍体积100%酒精+1/10体积醋酸钠（pH=5.2），-80度沉淀30min，离心，加1ml 75%酒精洗涤，离心，再加100%酒精洗 涤。
PCR产物一般补水至100ul，酒精都用预冷的。
上海生工有专门的纯化试剂盒，得到的量都很大
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4楼2012-04-07 23:15:29
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