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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 谁做过乙醇沉淀法浓缩DNA呀?离心之后能用肉眼看到DNA吗?

谁做过乙醇沉淀法浓缩DNA呀?离心之后能用肉眼看到DNA吗?
我是用琼脂糖凝胶回收试剂盒回收之后的PCR产物,用乙醇沉淀法浓缩DNA,离心之后看不到有DNA沉淀,这咋办呀?是本来就看不到还是没沉淀下来?有做过的虫子给俺个建议呀
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好孩子!
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zhang8826857: 金币+5, 有帮助 2012-04-08 09:56:08
做过这方面实验,提供一点我的经验:如果量少的话是看不见的,但是乙醇沉淀(最好加盐助沉)确实可以沉淀DNA,不用担心沉淀不下来。另外离心时离心管最好都要有一个固定的放置方式,这样离心完后虽然看不见但可以知道沉淀在什么位置,从而可以避免用枪吸出乙醇时同时也将DNA吸走~~~
6楼2012-04-08 08:01:54
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xmuring

木虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 有帮助, 感谢回帖,我就是胶回收的,但是需要极大的浓缩,所以问乙醇沉淀的问题呀 2012-04-07 22:11:08
我做过乙醇沉淀法浓缩DNA,但不是胶回收之后的,DNA沉淀一般是在管底的一层透明的东西,对着灯光看能看出来跟离心管的折射率不一样。
话说你回收PCR产物为什么不直接用PCR产物回收试剂盒呢?我用过胶回收试剂盒,回收率特别特别低,不知道是不是操作原因。。。
2楼2012-04-07 22:04:12
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mjzjily

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zhang8826857: 金币+5, 有帮助, 多谢多谢呀,我加乙酸铵也可以吧? 2012-04-08 09:29:39
首先,乙醇沉淀DNA是需要盐离子的。所以只加乙醇效果不一定会好。用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,DNA才能沉淀。一般可以采用钠离子。
此外,如果浓缩倍数不是很大的话,或许在胶回收操作时,减少洗脱液的用量,也能提高浓度。
祝实验顺利哈~~~
扎实科研
3楼2012-04-07 22:34:48
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zhang8826857: 金币+5, 有帮助 2012-04-08 09:55:55
这要看你DNA的量,一般PCR产物用酒精沉淀的话应该能看到的
方法:PCR产物+2.5倍体积100%酒精+1/10体积醋酸钠(pH=5.2),-80度沉淀30min,离心,加1ml 75%酒精洗涤,离心,再加100%酒精洗 涤。
PCR产物一般补水至100ul,酒精都用预冷的。
上海生工有专门的纯化试剂盒,得到的量都很大
4楼2012-04-07 23:15:29
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