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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 急！！！关于肝微粒体一相代谢和二代UGT的问题
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77777xiaohua

新虫 (初入文坛)

[求助] 急！！！关于肝微粒体一相代谢和二代UGT的问题

本人想做一个黄酮类化合物的一相代谢和二相代谢的UGT
由于刚刚接触这个领域说以有很多问题，请教大家
1.化合物的溶解
指导原则说化合物若溶解于有机溶液中，不应超过1%
由于用有机溶剂溶解对酶活性有影响
所以我想试着用其他的溶解
看有的文献是用有机溶剂溶解完，用甘油水溶解
由于我的药比较贵，我应该怎么试它的溶解度，方便快捷呢/
假设我真的用有机溶剂做，是否对酶的活性影响很大呢
2 二相代谢之UGT体系问题
看UGT时，比较懵
有的人体系用的是Tris缓冲液，有的用的是PBS，有的人的Ph是7.4；有的是7.5；有的8.0。
所以想请教最平常的体系是什么？PH是多少？
穿孔剂大家都用丙甲菌素吗？用什么溶解它？我看文献有的用DMSO？这不是有机溶剂吗？
为什么用PBS？体系具体的配置是什么？
3 二相代谢之UGT ：葡萄糖二酸1，4一内酯
看有的人加这个，有的人不加
我用肝微粒体做，是不是不用加这个。
4底物的最低浓度怎么选择
在初试时，或者考察酶反应时间或酶浓度时，大家都用药物的最低浓度
这个最低浓度是怎么确定的啊？
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1楼 2012-04-06 13:18:19
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77777xiaohua

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ronaldoli198311 at 2012-04-06 16:12:38:
一般来说DMSO的溶解性还是很好的。尽可能的减少有机试剂的比例，储备液的浓度高一些。缓冲体系就是最大限度的模拟体内条件。7.4的比较多。葡萄糖二酸1，4一内酯是抑制葡醛酸结合产物水解的，加了的话可以更好的检 ...

1那二相UGT用PBS系统吗，还是我用Tris系统就行
2还有酶活性您猜测过吗？或者您用什么经典的底物验证吗，酶有活性呢？
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3楼2012-04-06 18:13:24
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ronaldoli198311

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
77777xiaohua: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-04-06 18:11:18
豆哥: 金币+1, 鼓励新虫，加油。 2012-04-07 08:53:55
一般来说DMSO的溶解性还是很好的。尽可能的减少有机试剂的比例，储备液的浓度高一些。缓冲体系就是最大限度的模拟体内条件。7.4的比较多。葡萄糖二酸1，4一内酯是抑制葡醛酸结合产物水解的，加了的话可以更好的检测不加的话问题也不大。底物的最佳浓度严格来说要酶动力学考察的，如果不知道Km的话就根据自己的检测条件来选一个浓度，不要太小。
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2楼2012-04-06 16:12:38
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ronaldoli198311

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
77777xiaohua: 金币+2, ★有帮助 2012-04-07 08:44:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by 77777xiaohua at 2012-04-06 18:13:24:
1那二相UGT用PBS系统吗，还是我用Tris系统就行
2还有酶活性您猜测过吗？或者您用什么经典的底物验证吗，酶有活性呢？

PBS的比较多一些，这个也比较好配一些，酶的活性如果是商业获得的一般都没什么大问题，验证的话可以选一些比较经典的二相代谢底物，槲皮素之类的看一下
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4楼2012-04-07 07:27:35
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yan児

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ronaldoli198311 at 2012-04-06 16:12:38
一般来说DMSO的溶解性还是很好的。尽可能的减少有机试剂的比例，储备液的浓度高一些。缓冲体系就是最大限度的模拟体内条件。7.4的比较多。葡萄糖二酸1，4一内酯是抑制葡醛酸结合产物水解的，加了的话可以更好的检测 ...

你好，请问乙醛是UGT2的底物吗？
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5楼2014-10-17 19:22:51
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