16楼: Originally posted by xinshen0915 at 2012-04-05 16:58:45:
你做个阳性对照试一下吧，看是不是体系中有问题，找个你确定能扩出来的模板和引物，最好这个对照的目的片段扩出来与你的实验组的目的片段大小和退火温度比较相近，如果此阳性对照能扩出来，而你的实验组仍扩不出 ...

17楼: Originally posted by 麻花13 at 2012-04-05 18:49:51:
尝试一下用小体系，20ul，有时候体系不同，结果会相差很大
我就有一次做overlap，20ul体系做出来，50ul体系，条带却怎么也跑不动，好像不止一次
此外，建议在做PCR前，做一下酶切鉴定，看看目的条带到底 ...

18楼: Originally posted by 小白虾 at 2012-04-05 20:43:31:
你好，你确定引物没有问题?引物二聚体特别多，你可以做个退火温度梯度试试。
至于模板的量确实太多啦，再不确定做个阳性对照。体系各物质的量合适吗？

19楼: Originally posted by to-be at 2012-04-05 22:43:57:
楼上们的建议都很实际，如果以上问题都排除了，看到电泳图中引物二聚体很浓，可能怀疑两个问题：
1：引物稀释的有问题，浓度不正确，导致扩增失败。
2：引物设计的不好，实在不行就重新设计引物吧。多考虑下两条 ...

20楼: Originally posted by laojiu9878 at 2012-04-06 08:36:39:
模板太多，0.5质粒太多，引物怎么样？？

21楼: Originally posted by yanfeier at 2012-04-06 15:50:08:
pcr这样的结果很难说的，你的去一步一步的去分析解决，如果你敢肯定的模板没有问题吗？引物呢？这两个是主要的分析方向。你跑出来的绝对不会是模板的，我们一般如果用质粒做模板，一般会稀释0.1或者0.01都是没有问 ...

22楼: Originally posted by sunwei57 at 2012-04-06 21:51:27:
模板的量加的太大,稀释100-1000倍取1ul