| 查看: 2676 | 回复: 29 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
zhang8826857铁杆木虫 (著名写手)
|
[求助]
求解释这pcr是啥问题，帮同学问的^_^
|
|
这是以质粒为模板，扩增质粒上的EGFP基因，结果没扩出来，是不是模板的量加的太大呀？跑出来的条带是模板吧？我提质粒之后，50ul的pcr体系加了模板0.5微升，没做出来，然后我把提的质粒稀释了10倍，加0.5ul又没做出来，连条带都没有，大家帮着分析下士啥问题呀？（最右边是天根Marker3，200bp，500，800，1200，2000，3000，4500bp，目的片段应该是700左右，从右边数第二三个不是，是帮别人跑了两个样，其余的是pcr的结果） [ Last edited by zhang8826857 on 2012-4-5 at 09:37 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有249人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
28楼2012-04-07 09:41:55
2楼2012-04-05 09:44:35
3楼2012-04-05 09:52:49
xinshen0915
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 67.3
- 散金: 7
- 帖子: 57
- 在线: 26.5小时
- 虫号: 1737087
- 注册: 2012-04-05
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 很认同，考虑梯度很有道理的啊 2012-04-05 11:39:18
zhang8826857: 金币+5, ★有帮助 2012-04-05 15:51:34
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 很认同，考虑梯度很有道理的啊 2012-04-05 11:39:18
zhang8826857: 金币+5, ★有帮助 2012-04-05 15:51:34
|
下面的条带应该是引物二聚体，上面的条带很有可能是质粒模板，在做PCR之前要先检测质粒的浓度，一般以质粒为模板做PCR扩增是应该先稀释模板的。问题可以考虑从几个方面解决： 1、确保你的反应体系没有问题，看是否有某种成分未加，确保DNA聚合酶,dNTP, ddH2O等都没有问题； 2、换一种DNA聚合酶试一下； 3、看是否是退火温度设置不合理，可以考虑梯度扩增； 4、如果换了聚合酶和退火温度还是扩不出来，就得考虑是不是引物设计不合理了。 |
4楼2012-04-05 10:01:55