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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白表达偏大
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iamboy

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达偏大

原核表达一蛋白，理论分子量26kd，但是表达出来有31kd左右，本人先后用三个不同的载体表达该蛋白，分子量都是在31kd左右，本蛋白的理论等电点在8.7左右，求解为什么表达出来的偏大？谢谢
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1楼 2012-03-31 20:44:47
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
iamboy: 金币+4, ★有帮助, 谢谢你 2012-04-01 09:17:41
你是怎么确定你的蛋白大小的，根据SDS-PAGE标准量MARK么？PAGE只能大概看出你的蛋白大小，不标准的，你最好要通过质谱来确定你的蛋白真正大小。
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2楼2012-04-01 08:53:54
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highjmq

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
iamboy: 金币+3, ★有帮助, 谢谢你 2012-04-05 10:21:02
楼上说的对，是看你怎么确定分子量的，marker因为胶或者电泳的时候都会有些飘逸，定分子量不是特别准。然后还有一个可能的原因是表达蛋白发生了折叠，磷酸化修饰等得变化，所以才导致了你的分子量偏大
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3楼2012-04-01 11:14:30
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
iamboy: 金币+3, ★有帮助, 谢谢你 2012-04-05 10:21:12
有没有将你的标签序列和中间的柔性多肽区域计算进去呢
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与人玫瑰手有余香
4楼2012-04-01 12:12:51
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

★
iamboy: 金币+1, ★有帮助 2012-04-05 10:21:22
差了5000道尔顿，怀疑你是不是用的PET的表达系统，HIS标签捏
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与人玫瑰手有余香
5楼2012-04-01 12:13:45
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
iamboy: 金币+1, ★有帮助 2012-04-05 10:21:30
引用回帖:
5楼: Originally posted by 路人甲007 at 2012-04-01 12:13:45:
差了5000道尔顿，怀疑你是不是用的PET的表达系统，HIS标签捏

你要看看用的是什么载体，有没有标签什么的
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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
6楼2012-04-01 16:00:32
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
iamboy: 金币+3, ★有帮助 2012-04-05 10:21:43
首先要确定你是用什么方法检测蛋白分子量的，如果是sds-page那么这点误差是很正常的。
其次，你的蛋白是不是带有Tag的,Tag的分子量算进去了没有？
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7楼2012-04-01 16:43:13
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wjm0403

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
iamboy: 金币+3, ★有帮助 2012-04-05 10:21:50
说不定这是一个重大的发现，有一些蛋白属于固有无结构蛋白（iup）预测的分子量大小和电泳中显示的分子量相差较大。一般这类蛋白在电泳时的迁移速率偏慢，如果真像楼主所说，就这个蛋白可以发一篇SCI(IF2.0以上)
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8楼2012-04-03 21:53:13
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

★ ★
iamboy: 金币+2, 谢谢你 2012-04-09 12:59:21
引用回帖:
8楼: Originally posted by wjm0403 at 2012-04-03 21:53:13:
说不定这是一个重大的发现，有一些蛋白属于固有无结构蛋白（iup）预测的分子量大小和电泳中显示的分子量相差较大。一般这类蛋白在电泳时的迁移速率偏慢，如果真像楼主所说，就这个蛋白可以发一篇SCI(IF2.0以上)

我看过一篇文献
就是证明表达的蛋白表达时就是会发生偏移，偏大
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与人玫瑰手有余香
9楼2012-04-07 10:25:30
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