24小时热门版块排行榜    

查看: 1453  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Pushing2012

金虫 (正式写手)


[交流] 蛋白表达

最近表达了个蛋白,用的Pet30做载体,目标蛋白41kDa,IPTG诱导后SDS-PAGE检测在36kDa出现明显新的条带,空白菌和表达菌都在41kda有条带,镍柱纯化后得到的蛋白在41kDa,这个让我无法理解,为什么跑胶时新出现的蛋白在36kDa,而纯化出的蛋白在41kDa。 做酶活测试没有活性,请问在做酶活测试时有没有什么注意事项!请高人赐教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

to-be

金虫 (正式写手)



Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
1. 预测的蛋白分子量与实际是有差距的。
2.如果确定41KDa是目标蛋白,36KDa蛋白的出现可能是目标蛋白表达不完全(如果标签在N段,可能应该也会挂Ni柱),也可能是些本底表达的杂蛋白,而目标蛋白表达量很低,不明显。
3. 测酶活注意huffer,温度等因素保持活性。如没有活性,要么失活了,要么不是目标蛋白。建议拿诱导的菌液测酶活。
11楼2012-03-31 23:11:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

whb21

木虫 (著名写手)



Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
这个确实有点诡异,建议你做个ELISA看看表达出来的蛋白是不是你要的,
2楼2012-03-31 10:08:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
表达的蛋白是在上清吗?
3楼2012-03-31 14:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunwei57

木虫 (小有名气)



Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
全程低温操作,建议重新跑胶检测 你的蛋白
4楼2012-03-31 16:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
Rosy_yidun13楼
2012-04-01 10:13   回复  
Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币-10, 广告 2012-04-01 18:06:42
西瓜: 编辑内容 2012-04-01 18:06
-- [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-1 at 18:06 ]
Rosy_yidun14楼
2012-04-01 10:14   回复  
西瓜: 编辑内容 2012-04-01 18:06
-- [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-1 at 18:06 ]
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +8 majunge000 2026-08-10 9/450 2026-08-12 22:17 by 虫友是什么虫
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
请填处理意见