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Pushing2012

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白表达

最近表达了个蛋白，用的Pet30做载体，目标蛋白41kDa,IPTG诱导后SDS-PAGE检测在36kDa出现明显新的条带，空白菌和表达菌都在41kda有条带，镍柱纯化后得到的蛋白在41kDa,这个让我无法理解，为什么跑胶时新出现的蛋白在36kDa，而纯化出的蛋白在41kDa。 做酶活测试没有活性，请问在做酶活测试时有没有什么注意事项！请高人赐教!
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1楼 2012-03-31 09:37:30
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to-be

金虫 (正式写手)
★
Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
1. 预测的蛋白分子量与实际是有差距的。
2.如果确定41KDa是目标蛋白，36KDa蛋白的出现可能是目标蛋白表达不完全（如果标签在N段，可能应该也会挂Ni柱），也可能是些本底表达的杂蛋白，而目标蛋白表达量很低，不明显。
3. 测酶活注意huffer，温度等因素保持活性。如没有活性，要么失活了，要么不是目标蛋白。建议拿诱导的菌液测酶活。
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11楼2012-03-31 23:11:42
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whb21

木虫 (著名写手)
★
Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
这个确实有点诡异，建议你做个ELISA看看表达出来的蛋白是不是你要的，
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2楼2012-03-31 10:08:30
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
表达的蛋白是在上清吗？
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3楼2012-03-31 14:05:00
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sunwei57

木虫 (小有名气)
★
Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
全程低温操作,建议重新跑胶检测 你的蛋白
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4楼2012-03-31 16:17:16
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Rosy_yidun13楼
2012-04-01 10:13   回复  
Pushing2012(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币-10, 广告 2012-04-01 18:06:42
西瓜: 编辑内容 2012-04-01 18:06
-- [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-1 at 18:06 ]
Rosy_yidun14楼
2012-04-01 10:14   回复  
西瓜: 编辑内容 2012-04-01 18:06
-- [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-1 at 18:06 ]
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