| 查看: 4291 | 回复: 2 | |||
| 本帖产生 1 个 ACI ，点击这里进行查看 | |||
damaolehehe木虫 (著名写手)
|
[求助]
HPLC流动相及其配比该如何选取？
|
||
|
对于一种文献中没有HPLC方法报道的化合物如何设置流动相，该遵循怎样的规律进行摸索和尝试？一头雾水啊，各位虫虫给讲讲啊~ 而且用不同的流动相发现峰数和出峰位置相差很多 怎么判断峰出没出全？ 对于反相柱什么时候用甲醇-水什么时候用乙腈-水？ 对于比例应该怎样的顺序去摸索？ 从50:50往两端摸索 还是从两端向中间摸索呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
号外号外
已经有4人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有22人回复
-
人气不行了
已经有9人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有6人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有5人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有19人回复
-
建议基金发布提前给出明确的时间点
已经有16人回复
-
今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果
已经有21人回复
-
估计是周四
已经有4人回复
-
我面上完蛋了
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用HPLC法测定 流动相如何配制？ 谢谢
已经有5人回复
- 高效液相色谱使用磷酸盐做流动相时应该注意什么
已经有21人回复
- 用HPLC分析螯合剂应该用什么样的流动相
已经有7人回复
- 关于HPLC的流动相
已经有5人回复
- HPLC测定苯甲醇和苯甲醛混合样，如何确定流动相？
已经有5人回复
- 【求助】HPLC测盐酸环丙沙星片该用流动相溶解吗？
已经有4人回复
- 【求助】过了MCI的物质上HPLC，请问流动相怎样选择？
已经有5人回复
- 【求助】HPLC流动相问题
已经有7人回复
- 【求助】HPLC分析流动相选择问题——请教
已经有6人回复
- HPLC流动相配置
已经有5人回复
- 【交流】HPLC-ELSD流动相选择的问题
已经有17人回复
痴夷子皮
版主 (文坛精英)
老痞
- ACI: 12
- 应助: 2016 (讲师)
- 贵宾: 5.368
- 金币: 54487.3
- 散金: 41688
- 红花: 303
- 沙发: 1206
- 帖子: 32611
- 在线: 4303.7小时
- 虫号: 674536
- 注册: 2008-12-14
- 性别: GG
- 专业: 无神论
- 管辖: 人文社科
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2, ACI+1, 果断给了~ 感谢应助 ^^ 2012-03-30 23:36:28
damaolehehe: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-08-13 08:55:42
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2, ACI+1, 果断给了~ 感谢应助 ^^ 2012-03-30 23:36:28
damaolehehe: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-08-13 08:55:42
|
自己摸索条件。 a、样品性质 主要了解化合物的结构、分子量、pKa、UV、样品浓度范围、溶解度等。 b、色谱柱选择 样品能溶于水-有机混合液的大多数样品（特别是中性或非离子化合物），可以选择反相HPLC，流动相选择水-有机溶剂，色谱柱可以选择C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比较多。 样品为离子或可电离的化合物（特别是碱性或阳离子样品），可以选择离子对HPLC，流动相选择水-有机溶剂，控制pH的缓冲液和离子对试剂，色谱柱可选择C18、C8、氰基。一般C18用得比较多。 若反相或离子对HPLC无效时，或样品不溶于水-有机混合液。可以选择正相HPLC体系。流动相选择有机溶剂混合液，色谱柱选择氰基、氨基、硅胶、二醇基。 c、初始分离条件（相对较好的首要选择、等度） 色谱柱：150X4.6mm、5um、固定相为C18或C8 流动相：缓冲液-乙腈，缓冲液可选择纯水或缓冲盐（浓度10~30mM）（若中性样品，无需使用缓冲盐）并用酸碱调控pH（如果pH小于2.5，建议选择pH稳定的色谱柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以选择80~100%。 离子对等添加剂，开始时请不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱温35~40℃。 样品：（最好以流动相溶解样品）进样体积小于25uL，进样量小于100ug。 d、液相方法基本目标 分离度：R大于1.5 分离时间：5~10min较理想 定量：RSD小于2% 压力：基本要求小于200bar（20M） 针对基本目标，按实际情况进行调整，譬如流动相实际组分比例，缓冲盐浓度及pH，柱温，梯度等 |
2楼2012-03-29 18:39:07
lihuan0525
金虫 (职业作家)
- 应助: 565 (博士)
- 金币: 2155
- 散金: 687
- 红花: 15
- 帖子: 3301
- 在线: 551.8小时
- 虫号: 1292024
- 注册: 2011-05-11
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
3楼2012-03-29 20:13:26
20