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fjaxwyc木虫 (正式写手)
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[求助]
HPLC测定苯甲醇和苯甲醛混合样，如何确定流动相？
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各位大侠，小弟要用HPLC测一系列含不同浓度苯甲醛的苯甲醇样，请问要如何设定流动相，我们实验室的待选溶剂有乙腈、甲醇和水。另外紫外波长设什么好呢？由于小弟是初次接触HPLC，几乎什么都不懂，谢谢各位了 [ Last edited by fjaxwyc on 2011-6-23 at 18:56 ] |
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这种东西都是先查文献，在文献的基础上调整。如果查不到，那就自己摸索建立。 我说反相方法 首先你的苯甲醇、苯甲醛都是弱酸性物质，流动相的pH最好小于他们的pka两个单位以上，使他们保持分子状态，一般流动相盐的浓度在25mmol/ml比较好，刚开始不要加三乙胺、离子对试剂等试剂，在调整流动相未能起到很好的作用时再考虑加不加。 色谱柱选择150mm的柱子，流速为1.5ml/min 。因为一般的常规分析液相的流速范围为0.5~2.0ml/min。太高或太低对做方法学耐用性有影响。建立分析方法可以考虑让其快些出峰， 检测波长有分析物的紫外吸收波长决定。两种成分选波长时要兼顾两个物质都能准确检测。并非一定要选择最大吸收波长。 你的两个分析物都是强极性物质，如果用反相液相色谱，初始的有机相比例别太高了，从较低的比例开始，例如20%。 另外告诉你一个有用的经验：一般来说当你的有机相比例降低10%，物质的保留时间会增加三倍。 柱温建议30度。不要选择环境温度即不控制柱温。因为不同的地点，不同的时间环境温度可能不一样，甚至存在较大差别。可能会对实验的重现性造成干扰。  |
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