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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC测定苯甲醇和苯甲醛混合样，如何确定流动相？
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fjaxwyc

木虫 (正式写手)

[求助] HPLC测定苯甲醇和苯甲醛混合样，如何确定流动相？

各位大侠，小弟要用HPLC测一系列含不同浓度苯甲醛的苯甲醇样，请问要如何设定流动相，我们实验室的待选溶剂有乙腈、甲醇和水。另外紫外波长设什么好呢？由于小弟是初次接触HPLC，几乎什么都不懂，谢谢各位了

[ Last edited by fjaxwyc on 2011-6-23 at 18:56 ]
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1楼2011-06-23 18:46:12
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zgf340631735

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

fjaxwyc(金币+2): 谢谢回帖！ 2011-06-23 19:14:45
fjaxwyc(金币+8): 2011-06-25 13:08:19
先找可以溶解两个样品的。然后用紫外扫一下看看吸收情况，确定波长。然后再上液相试试。
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学无止境
2楼2011-06-23 18:57:33
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fjaxwyc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zgf340631735 at 2011-06-23 18:57:33:
先找可以溶解两个样品的。然后用紫外扫一下看看吸收情况，确定波长。然后再上液相试试。

流动相选择，有没有比较好的已有文献或实例呢
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3楼2011-06-23 19:14:11
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yukepotato

金虫 (正式写手)

美猴王

【答案】应助回帖

fjaxwyc(金币+2): 谢谢回帖，看来只能自己尝试了 2011-06-23 23:12:28
这涉及到方法开发了，其实一开始我们只能向楼上所说的那样扫下两物质的吸收波长，也可在调流动相时直接用PDA全波长扫描查看，然后确定选用多少波长的；其次就是选择流动相了，先在等度下把两物质分开，再考虑梯度和流动相的确定！
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永远不要带着问题去找你的上司！
4楼2011-06-23 21:56:05
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News

专家顾问 (职业作家)
这种东西都是先查文献，在文献的基础上调整。如果查不到，那就自己摸索建立。
我说反相方法
首先你的苯甲醇、苯甲醛都是弱酸性物质，流动相的pH最好小于他们的pka两个单位以上，使他们保持分子状态，一般流动相盐的浓度在25mmol/ml比较好，刚开始不要加三乙胺、离子对试剂等试剂，在调整流动相未能起到很好的作用时再考虑加不加。
色谱柱选择150mm的柱子，流速为1.5ml/min 。因为一般的常规分析液相的流速范围为0.5~2.0ml/min。太高或太低对做方法学耐用性有影响。建立分析方法可以考虑让其快些出峰，
检测波长有分析物的紫外吸收波长决定。两种成分选波长时要兼顾两个物质都能准确检测。并非一定要选择最大吸收波长。
你的两个分析物都是强极性物质，如果用反相液相色谱，初始的有机相比例别太高了，从较低的比例开始，例如20%。  另外告诉你一个有用的经验：一般来说当你的有机相比例降低10%，物质的保留时间会增加三倍。
柱温建议30度。不要选择环境温度即不控制柱温。因为不同的地点，不同的时间环境温度可能不一样，甚至存在较大差别。可能会对实验的重现性造成干扰。
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水滴石穿！！
5楼2012-05-27 02:08:29
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yugijiang

木虫 (著名写手)
用ACN:0.1%H3PO4来做就可以
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6楼2012-07-01 11:00:05
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