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damaolehehe木虫 (著名写手)
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HPLC流动相及其配比该如何选取？
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对于一种文献中没有HPLC方法报道的化合物如何设置流动相，该遵循怎样的规律进行摸索和尝试？一头雾水啊，各位虫虫给讲讲啊~ 而且用不同的流动相发现峰数和出峰位置相差很多 怎么判断峰出没出全？ 对于反相柱什么时候用甲醇-水什么时候用乙腈-水？ 对于比例应该怎样的顺序去摸索？ 从50:50往两端摸索 还是从两端向中间摸索呢？ |
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【答案】应助回帖
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soundhorizo: 金币+2, ACI+1, 果断给了~ 感谢应助 ^^ 2012-03-30 23:36:28
damaolehehe: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-08-13 08:55:42
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自己摸索条件。 a、样品性质 主要了解化合物的结构、分子量、pKa、UV、样品浓度范围、溶解度等。 b、色谱柱选择 样品能溶于水-有机混合液的大多数样品（特别是中性或非离子化合物），可以选择反相HPLC，流动相选择水-有机溶剂，色谱柱可以选择C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比较多。 样品为离子或可电离的化合物（特别是碱性或阳离子样品），可以选择离子对HPLC，流动相选择水-有机溶剂，控制pH的缓冲液和离子对试剂，色谱柱可选择C18、C8、氰基。一般C18用得比较多。 若反相或离子对HPLC无效时，或样品不溶于水-有机混合液。可以选择正相HPLC体系。流动相选择有机溶剂混合液，色谱柱选择氰基、氨基、硅胶、二醇基。 c、初始分离条件（相对较好的首要选择、等度） 色谱柱：150X4.6mm、5um、固定相为C18或C8 流动相：缓冲液-乙腈，缓冲液可选择纯水或缓冲盐（浓度10~30mM）（若中性样品，无需使用缓冲盐）并用酸碱调控pH（如果pH小于2.5，建议选择pH稳定的色谱柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以选择80~100%。 离子对等添加剂，开始时请不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱温35~40℃。 样品：（最好以流动相溶解样品）进样体积小于25uL，进样量小于100ug。 d、液相方法基本目标 分离度：R大于1.5 分离时间：5~10min较理想 定量：RSD小于2% 压力：基本要求小于200bar（20M） 针对基本目标，按实际情况进行调整，譬如流动相实际组分比例，缓冲盐浓度及pH，柱温，梯度等 |
2楼2012-03-29 18:39:07
lihuan0525
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