应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC流动相及其配比该如何选取？
51/1返回列表
查看: 4118  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 ACI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

damaolehehe

木虫 (著名写手)

[求助] HPLC流动相及其配比该如何选取？

对于一种文献中没有HPLC方法报道的化合物如何设置流动相，该遵循怎样的规律进行摸索和尝试？一头雾水啊，各位虫虫给讲讲啊~
而且用不同的流动相发现峰数和出峰位置相差很多 怎么判断峰出没出全？
对于反相柱什么时候用甲醇-水什么时候用乙腈-水？
对于比例应该怎样的顺序去摸索？
从50:50往两端摸索 还是从两端向中间摸索呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
心简单，世界就简单，幸福才会生长；心自由，生活就自由，到哪都有快乐
1楼 2012-03-29 17:02:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上很全了，比例我觉得是从一端开始，到另一端吧
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-29 20:13:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2, ACI+1, 果断给了~ 感谢应助 ^^ 2012-03-30 23:36:28
damaolehehe: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-08-13 08:55:42
自己摸索条件。
a、样品性质
主要了解化合物的结构、分子量、pKa、UV、样品浓度范围、溶解度等。
b、色谱柱选择
样品能溶于水-有机混合液的大多数样品（特别是中性或非离子化合物），可以选择反相HPLC，流动相选择水-有机溶剂，色谱柱可以选择C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比较多。
样品为离子或可电离的化合物（特别是碱性或阳离子样品），可以选择离子对HPLC，流动相选择水-有机溶剂，控制pH的缓冲液和离子对试剂，色谱柱可选择C18、C8、氰基。一般C18用得比较多。
若反相或离子对HPLC无效时，或样品不溶于水-有机混合液。可以选择正相HPLC体系。流动相选择有机溶剂混合液，色谱柱选择氰基、氨基、硅胶、二醇基。
c、初始分离条件（相对较好的首要选择、等度）
色谱柱：150X4.6mm、5um、固定相为C18或C8
流动相：缓冲液-乙腈，缓冲液可选择纯水或缓冲盐（浓度10~30mM）（若中性样品，无需使用缓冲盐）并用酸碱调控pH（如果pH小于2.5，建议选择pH稳定的色谱柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以选择80~100%。
离子对等添加剂，开始时请不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱温35~40℃。
样品：（最好以流动相溶解样品）进样体积小于25uL，进样量小于100ug。
d、液相方法基本目标
分离度：R大于1.5
分离时间：5~10min较理想
定量：RSD小于2%
压力：基本要求小于200bar（20M）
针对基本目标，按实际情况进行调整，譬如流动相实际组分比例，缓冲盐浓度及pH，柱温，梯度等
赞一下(2人) 回复此楼
守候在风中的宁静。
2楼2012-03-29 18:39:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭