24小时热门版块排行榜    

查看: 1824  |  回复: 18
本帖产生 2 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)

[求助] 套叠PCR

我想把基因内部的一段序列突变掉,采用套叠PCR的方法,两段PCR回收的大小分别为1400bp和200bp左右,但将这两段回收产物混合后作模板进行套叠,却怎么也扩不出目的带,请问是什么原因啊?我是大概按照浓度比1:1混合的,并且也试过不同体积的混合,结果都是一样,片段在250bp稍往上一点
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 敏敏8305 at 2012-03-27 18:10:25:
请问楼主是做关于噬菌体展示技术方面的吗?

呵呵,不是的,就是研究基因的功能,缺失掉一段看基因功能有没有变化
5楼2012-03-27 20:52:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖提供有帮助的信息! 2012-03-27 19:17:27
你说的应该是重叠延伸PCR吧,第二步PCR的确比较难P,原因也多种多样,我看你还是在退火温度上琢磨一下吧,试试梯度之类的……这个P不出来的具体原因实在是很难分析,原因太多。重叠部分过短,重叠部分有非特异性结合等等,爱莫能助!
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
2楼2012-03-27 13:12:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by imyting at 2012-03-27 13:12:15:
你说的应该是重叠延伸PCR吧,第二步PCR的确比较难P,原因也多种多样,我看你还是在退火温度上琢磨一下吧,试试梯度之类的……这个P不出来的具体原因实在是很难分析,原因太多。重叠部分过短,重叠部分有非特异性结 ...

是一个基因内缺失一段,用的基因内引物就把缺失的那段跨过去,扩增出两段后,再用全长基因的上下游引物,PCR混合产物作模板扩增。梯度我也试过,没什么效果
3楼2012-03-27 15:50:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

敏敏8305

铜虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 应助指数-1, 希望以后不应助的话,不要点应助哦 2012-03-29 10:26:22
请问楼主是做关于噬菌体展示技术方面的吗?
My heart will go on!
4楼2012-03-27 18:10:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 帮忙看看fileCode +4 wwncly 2026-08-10 8/400 2026-08-10 22:07 by demonstreets
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见