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zp198803

金虫 (小有名气)

[求助] FITC标记1型胶原蛋白

看见论坛上讲FITC与胶原蛋白混合，振荡。不知道是不是这么简单？另外，FITC要在碱性条件下染色效率较高，而胶原蛋白的等电点应该在4左右，怎么解决这个问题。求做过的虫友解释下
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1楼2012-03-27 09:58:43
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
lixiangde: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-31 23:33:50
zp198803: 金币+5, ★有帮助 2012-04-05 09:52:45
引用回帖:
11楼: Originally posted by zp198803 at 2012-03-31 16:53:43:
透析之后的干燥过程是需要冷冻干燥么？还是抽真空就可以了

建议冷冻干燥或者超滤管离心浓缩，超滤管的截留分子量可以选择1万左右的，选择密理博的。这两个方法比较好，常用
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12楼2012-03-31 22:49:27
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迷雾森林0903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zp198803: 金币+5, ★有帮助 2012-03-27 14:00:56
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-28 18:16:08
FITC标记胶原蛋白我没试过，我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶（等电点pH7.2），是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应，碱性条件下只是使蛋白质带负电，应该不影响标记，但是pH太高可能会使蛋白质失活或部分变性，这个要看对你的蛋白是不是影响很大。
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迷雾森林
2楼2012-03-27 13:35:46
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zp198803

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 迷雾森林0903 at 2012-03-27 13:35:46:
FITC标记胶原蛋白我没试过，我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶（等电点pH7.2），是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应，碱性条件下只是使蛋白质带负电，应该不影响标记，但是pH太高 ...

谢谢
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3楼2012-03-27 14:00:40
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zp198803

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 迷雾森林0903 at 2012-03-27 13:35:46:
FITC标记胶原蛋白我没试过，我最近在做FITC标记辣根过氧化物酶（等电点pH7.2），是在碱性pH8.5条件下做的。FITC标记原理是异硫氰基与蛋白质上氨基反应，碱性条件下只是使蛋白质带负电，应该不影响标记，但是pH太高 ...

那你标记是直接混合，振荡么？还是要用试剂盒？
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5楼2012-03-28 09:40:05
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