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银虫 (初入文坛)

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[求助] 求助~蛋白分离怎么选择预装柱呀

菜鸟一枚~最近在做蛋白纯化实验。
DEAE-Sephrose FF层析后得到有作用的活性肽，SDS-PAGE电泳结果不理想，条带一团一团的，没有得到单一条带~求高人指教~跪谢

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1楼 2012-03-25 23:04:55

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lujiebio

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

DEAE是阴离子交换剂，可与带负电荷的蛋白质阴离子进行交换。进行离子交换层析的时候需要注意溶液的pH值与蛋白质等电点之间的关系，以及洗脱液的盐离子浓度。
溶液的pH值与蛋白质等电点相同时，静电荷为0，当溶液pH值大于蛋白质等电点时，则羧基游离，蛋白质带负电荷。反之，溶液的pH值小于蛋白质等电点时，则氨基电离，蛋白质带正电荷。溶液的pH值距蛋白质等电点越远，蛋白质的电荷越多。反之则越少。
在适当的盐浓度下，溶液的pH值高于等电点时，蛋白质被阴离子交换剂所吸附；当溶液的pH值低于等电点时，蛋白质被阳离子交换剂所吸附。由于各种蛋白质所带的电荷不同。它们与交换剂的结合程度也不同，只要溶液pH值发生改变，就会直接影响到蛋白质与交换剂的吸附，从而可能把不同的蛋白质逐个分离开来。
在洗脱的过程中，如果使用连续梯度洗脱，需要注意洗脱液的总体积，总体积过小会导致梯度过大，蛋白质分离不开。如果使用不连续梯度洗脱，一般要知道大概多少盐浓度的条件下蛋白质会被洗脱下来。
最好能够发一个图上来，看看你的蛋白到底是怎样一团一团的。

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