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心情一杯

金虫 (小有名气)

[求助] 微粒体代谢实验

各位大侠，我现在正在准备测氨氯地平在人肠微粒体孵育体系中的Km和Vm，但查文献后还是很困惑：
1.孵育体系中PBS、NADPH再生系统、肠微粒体还有药物的量怎么确定呢？？？
2.NADPH再生系统一般都是自己配的，本来就是混合物，加入孵育体系中怎么确定加入量呢？？
3.NADPH再生系统具体怎么配置呢？好像有好几种，但不确定到底哪种最好啊？

请路过的高手赐教，急啊
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1楼 2012-03-25 21:29:49
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老宋好好

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-03-30 13:44:26
反应体系中氨氯地平的浓度可设为1-200 uM，比较常用肠微粒体作用浓度0.5或1 mg/ml都可以，反应时间设为1h，PBS自己查个配方，pH7.4，如果条件允许可以买点NADPH用，计算氨氯地平的减少量，以减少量的倒数作为纵坐标，氨氯地平起始浓度的倒数作为横坐标，计算米氏常数和最大反应速率
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2楼2012-03-29 16:22:28
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心情一杯

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 老宋好好 at 2012-03-29 16:22:28:
反应体系中氨氯地平的浓度可设为1-200 uM，比较常用肠微粒体作用浓度0.5或1 mg/ml都可以，反应时间设为1h，PBS自己查个配方，pH7.4，如果条件允许可以买点NADPH用，计算氨氯地平的减少量，以减少量的倒数作为纵坐 ...

真是太感谢您了，只是我查了文献有好几种配法，有的是用NADP、G-6P、G-6PDH、和氯化镁配置，有的直接用NADPH钠盐和氯化镁配置，请问NADPH再生系统怎么配置比较可靠呢？
还有NADPH再生系统包含几种物质，怎么确定最终浓度呢？
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3楼2012-03-30 12:00:18
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