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decloud

木虫 (著名写手)

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专业: 药物学其他科学问题

[求助] 如何插入40bp的小片段已有1人参与

分子牛人多,继续搬问题

大家貌似对大片断都很熟悉,我来个小的...

我要在一个外源基因(900bp)的片段后面插入一段40bp左右的linker(有方向要求),,有没有高招.怎么样在不动这个外源基因(其3'端末端是ApaI, 并且就这么一个)的情况下,插入小片段.

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适则存乙，劳则忙乙，

1楼2012-03-25 04:19:40

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to-be

金虫 (正式写手)

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专业: 神经生物学

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-26 10:43:40

设计引物时overlap的区域有15bp即可。
1.900下游设计引物，包括15bplinker前面的序列；
2.设计linker上游引物，包括900后面的15bp；
3.用900上下游引物扩增；同时扩linker，或者合成；
4.再将产物混合摩尔比1:1做模板，用900上游和linker下游引物扩增，将他们串联起来。