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westlover

银虫 (著名写手)

[求助] 鼠骨髓细胞(rat bone marrow cell)培养的一个问题,请教大家。谢谢

为了评价氧化锆陶瓷片体外成骨细胞反应,打算在其上面培养rat bone marrow cell,测试 cell attachment, ALP, morphology, bone nodule等等。还没开始。
我们实验室的方案是,初级培养7天,不使用osteoblast诱导药品,种植到试样之后再用诱导药。结果,前几天一个学长投稿,直接被拒,理由是:“Cell work has fundamental mistakes. The authors have not isolated the stem cell population from the bone marrow. Therefore, the cells for the experiments are likely to be monocytes/macrophages. And the cells should have been characterized for their phenotype prior to their use. ”
找了最近几篇发在Biomaterials上的文章,发现很多人的做法是:初级培养7天,一开始就已经用osteoblast诱导药品,种植到试样之后继续使用。
我们实验室的方案已经用了7、8年了,前面一大批学长学姐毕业都做RBM cell,难道他们都错了?
=============
各位大侠,到底标准程序是怎样的?
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快乐丝丝

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流,欢迎光临生物材料版 2012-03-27 12:37:56
westlover: 金币+3, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:55
引用回帖:
7楼: Originally posted by westlover at 2012-03-27 08:29:55:
提取骨髓到培养瓶中,用的是含有osteoblast分化诱导药品的medium吗?换液后算是什么样纯化细胞?再培养几天然后种植?

换液后是贴壁的纯的MSC,培养基的低糖的DMEM,  我们研究分化时分离出来直接种植孔板里,四天后换液,然后换成诱导培养基;
18楼2012-03-27 12:04:24
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快乐丝丝

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-21 15:02:52
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:29
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:43:57
我们做BMC时,一般提骨髓至瓶或皿中,四天左右贴壁,然后换液同时算是纯化细胞,你可以把你的细胞流式测定下表面CD什么的以证明是。
2楼2012-03-21 12:14:40
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-21 15:03:02
westlover: 金币+2 2012-03-27 08:36:33
westlover: 金币+2, 谢谢。决定培养之初就采用分化诱导药品。 2012-03-29 16:44:08
如果 骨髓 没有经过 流式细胞仪筛选
骨髓里面的确有单个核细胞 与msc 混淆
用密度梯度离心照样不能去除 单个核细胞
单个核细胞 与 msc 的确在形态、比重方面无显著差异

还有可能是 你没有提供 成骨细胞的鉴定照片
3楼2012-03-21 14:15:32
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westlover

银虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liubin at 2012-03-21 14:15:32:
如果 骨髓 没有经过 流式细胞仪筛选
骨髓里面的确有单个核细胞 与msc 混淆
用密度梯度离心照样不能去除 单个核细胞
单个核细胞 与 msc 的确在形态、比重方面无显著差异

还有可能是 你没有提供 成骨细胞的鉴 ...

谢谢啊。如何确定是成骨细胞啊?
文献中,很多都是在分化药物诱导下培养7天,并没有确认完全转化。
======
重中之重,是不是从一开始培养就需要用分化诱导药品啊?
4楼2012-03-22 11:31:33
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