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[交流]
【交流】实验操作 小trick 已有3人参与
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请各位谈谈你们在实验中所发现的或实验室流传的 实验技巧！！！ 或者个人的实验经验或是认为很实用的方法！ 我先来说说：仅是一家之言，抛砖引玉，大家别见笑！也可能说的不对，仅代表我的观点。 1、胶回收后PCR： 那时候硕士时的老板不是很有钱，小提质粒都是自己配的试剂，所以胶回收也买的少。有次晚上做实验要胶回收然后PCR，发现没有盒子了，又不好老借别的实验室的。很郁闷，师兄推荐一方法很受用： 将胶切下来，冻-20，确保冻透了，取出用封口膜包住胶，用力挤压，就会有液体流出，然后吸取液体。稀释10-100倍，取1微升进行PCR，效果还是不错的。 2、做southern，测端粒长度： 标探针是用的是P32，因为量小（再量大也不会很多），标完后要沉淀离心回收探针（和回收核酸的过程一样，就是无水乙醇沉淀那个），肉眼根本看不到，但还是想看看，要不一部小心到了，那就麻烦了。 也是师兄了：说加入糖原就能够看到探针，果然是那样的，离心后有一个小白点，挺明显的。 可惜糖原的制备方法，我给搞丢了。。。。。。。 3、病毒包装 挺麻烦的，涉及的太多，只说铺细胞部分 现在我知道的有几种方法：A 加入细胞后晃前后左右的晃然后突然停！（我们实验室有的人用的较好） B 加入细胞后玩命的吹打，将细胞打散！（我们实验室有的人用的较好） C事先用培养基润板子，然后均匀加入细胞（曾今用过，但比D稍差点） D充分消化好细胞，将细胞直接加入空板，稍晃下铺满地面，如铺满了不晃也可以的（我做这个比较受用） 4感染病毒 无论贴壁的还是悬浮的，我都1800转，1.5小时室温离心，感染效率是会高些的。 5爬组织细胞： 最早是剪了组织，然后贴在铺了血清的平皿里2h，差不多贴牢点后加入少量的培养基（不能没过组织块），放培养箱里培养让他爬细胞。但发现不太好，组织块易飘。 还是剪碎组织后再用酶消化，然后铺细胞瓶里培养较好。细胞收得多。 [ Last edited by telomerase on 2012-3-19 at 10:21 ] |
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3楼2012-03-20 20:46:32
gaoyang636
木虫 (著名写手)
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