应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » Western Blot 显影时PGDF膜上全是荧光，求解，有没有懂的呀
161/2返回列表12下一页
查看: 4258  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

安医小枫

新虫 (初入文坛)

[求助] Western Blot 显影时PGDF膜上全是荧光，求解，有没有懂的呀

Western Blot 显影时PGDF膜上全是荧光，做了好几次都是一样，不知道什么原因，哪位大神指点一下呀！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-14 17:10:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
安医小枫: 金币+2, ★★★很有帮助, 封闭我是3小时，不知道你们做的时候是多长时间？ 2012-03-15 18:31:48
我想到的可能原因有两个：
1. 转膜后你的封闭是不是有问题，你是怎么封闭的啊
2. 一抗，二抗的特异性是不是不好。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-03-15 08:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
楼主把tween浓度提高到0。2或0。4试试吧，多洗几次显色把
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-03-17 00:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-03-15 08:32:07:
我想到的可能原因有两个：
1. 转膜后你的封闭是不是有问题，你是怎么封闭的啊
2. 一抗，二抗的特异性是不是不好。

支持楼上的。封闭出问题的可能性更大
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-15 09:15:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken126

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人估计：抗体特异性较差，发色液强度较高；
楼主可以将一抗及二抗浓度适当降低，另外可以试试强度较小的发色液。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-15 13:09:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狐狸尾巴

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果抗体就你一个人用，抗体的因素可以考虑，如果实验室里面别人用着很好，那就是操作问题了
重新封闭，延长封闭时间
降低抗体浓度
发色时降低浓度
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-15 15:19:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安医小枫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-03-15 08:32:07:
我想到的可能原因有两个：
1. 转膜后你的封闭是不是有问题，你是怎么封闭的啊
2. 一抗，二抗的特异性是不是不好。

封闭是用5%牛奶，时间是3个小时，够长了吧！一抗、二抗没问题，第一次出来了，结果重复就不行了，做了3次都一样！求解呀！
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-15 18:00:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoqi5992

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 安医小枫 at 2012-03-15 18:00:22:
封闭是用5%牛奶，时间是3个小时，够长了吧！一抗、二抗没问题，第一次出来了，结果重复就不行了，做了3次都一样！求解呀！

是在室温下吗，要是在室温下的话，你把脱脂奶浓度提高到10%试试呢。
还有你第一次出来的是什么情况，一点背景也没有吗？
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-16 08:22:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安医小枫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-03-16 08:22:44:
是在室温下吗，要是在室温下的话，你把脱脂奶浓度提高到10%试试呢。
还有你第一次出来的是什么情况，一点背景也没有吗？

是在室温下，第一次中间部分有些背景，但不强，能很清楚看到荧光条带。后来就不行了。
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-16 20:31:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安医小枫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-03-16 08:22:44:
是在室温下吗，要是在室温下的话，你把脱脂奶浓度提高到10%试试呢。
还有你第一次出来的是什么情况，一点背景也没有吗？

请问一下，脱脂奶粉提高到10%，是封闭时提高还是孵二抗的时候提高呢，或者都用10%的，谢谢啦
赞一下 回复此楼
9楼2012-03-16 20:38:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 安医小枫 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-29 09:24 by JzYBbHIXWSrW
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-29 09:18 by JzYBbHIXWSrW
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:34 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:18 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-28 23:19 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:28 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-28 22:21 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +7 zju2000 2026-09-26 8/400 2026-09-28 16:42 by beefly
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭