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安医小枫

新虫 (初入文坛)

[求助] Western Blot 显影时PGDF膜上全是荧光,求解,有没有懂的呀

Western Blot 显影时PGDF膜上全是荧光,做了好几次都是一样,不知道什么原因,哪位大神指点一下呀!
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2012-03-15 08:32:07:
我想到的可能原因有两个:
1. 转膜后你的封闭是不是有问题,你是怎么封闭的啊
2. 一抗,二抗的特异性是不是不好。

支持楼上的。封闭出问题的可能性更大
3楼2012-03-15 09:15:08
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
安医小枫: 金币+2, ★★★很有帮助, 封闭我是3小时,不知道你们做的时候是多长时间? 2012-03-15 18:31:48
我想到的可能原因有两个:
1. 转膜后你的封闭是不是有问题,你是怎么封闭的啊
2. 一抗,二抗的特异性是不是不好。
2楼2012-03-15 08:32:07
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ken126

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人估计:抗体特异性较差,发色液强度较高;
楼主可以将一抗及二抗浓度适当降低,另外可以试试强度较小的发色液。
4楼2012-03-15 13:09:46
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狐狸尾巴

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果抗体就你一个人用,抗体的因素可以考虑,如果实验室里面别人用着很好,那就是操作问题了
重新封闭,延长封闭时间
降低抗体浓度
发色时降低浓度
5楼2012-03-15 15:19:29
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