应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教离子交换柱纯化蛋白的问题
292/3返回列表上一页123下一页
查看: 3385  |  回复: 28
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lihuan0525

金虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 08:52:28:
重装过几次，都是这种情况，柱床塌陷，流速变得很慢，三四秒一滴。跑出来的峰都是这样：一个很低很宽的大峰。线性梯度太缓会不会导致峰变宽呢？梯度陡一些会不会改善峰形？

请问你的目标蛋白的等电点多少，你用的缓冲液的PH是多少，一般离子交换的ph和等电点相差一个ph
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2012-03-15 12:52:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-03-15 11:43:12:
平衡是要几倍柱体积的，是不没有平衡过来啊，确定上样前平衡液的ph是目的ph？

这个我知道，肯定已经充分平衡了的，虽然没用缓冲液平衡一夜。填料也肯定不会错，肯定是DEAE sep ff，不会犯这些错误的。
赞一下 回复此楼
12楼2012-03-15 12:53:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-15 12:52:40:
请问你的目标蛋白的等电点多少，你用的缓冲液的PH是多少，一般离子交换的ph和等电点相差一个ph

文献中报道的这种酶的等电点从4点几到6点几不等，不同菌种产的酶是不太一样的，我也不清楚我的酶等电点多少。我开始用pH6.5的磷酸缓冲液，发现穿透峰有酶活，挂柱不牢，故改为pH8.0的Tris-HCl。
赞一下 回复此楼
13楼2012-03-15 13:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 13:02:42:
文献中报道的这种酶的等电点从4点几到6点几不等，不同菌种产的酶是不太一样的，我也不清楚我的酶等电点多少。我开始用pH6.5的磷酸缓冲液，发现穿透峰有酶活，挂柱不牢，故改为pH8.0的Tris-HCl。

先把等电点弄清楚了吧，这样的话你摸条件的时候也容易点
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2012-03-15 13:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-15 13:10:35:
先把等电点弄清楚了吧，这样的话你摸条件的时候也容易点

请问在酶尚未纯化出来之前，有啥办法能弄清它的等电点呢？
赞一下 回复此楼
15楼2012-03-15 14:23:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狐狸尾巴

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目的蛋白可能存在多种构型
赞一下 回复此楼
16楼2012-03-15 14:51:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狐狸尾巴

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目的蛋白是不是发酵所得？
赞一下 回复此楼
17楼2012-03-15 14:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 狐狸尾巴 at 2012-03-15 14:51:52:
目的蛋白是不是发酵所得？

目的蛋白是真菌胞内酶，样品为菌丝匀浆提取液经硫酸铵沉淀后所得。
赞一下 回复此楼
18楼2012-03-15 14:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)
感觉是填料的问题，换试试，要不2m氢氧化钠再生一下
赞一下 回复此楼
19楼2012-03-15 15:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-03-15 15:01:24:
感觉是填料的问题，换试试，要不2m氢氧化钠再生一下

嗯，我每次过完柱子都用氢氧化钠处理的。如果真是填料坏了，那就必须换了。
赞一下 回复此楼
20楼2012-03-15 15:15:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 amq7392 的主题更新
292/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了 +11 wuchongjun 2026-08-20 15/750 2026-08-20 17:28 by wuchongjun
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +9 zju2000 2026-08-16 10/500 2026-08-20 15:56 by Leogzhya
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +14 医学老男孩 2026-08-20 16/800 2026-08-20 15:47 by LNP@mRNA
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭