24小时热门版块排行榜    

查看: 2878  |  回复: 28

lihuan0525

金虫 (职业作家)

引用回帖:
6楼: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 08:52:28:
重装过几次,都是这种情况,柱床塌陷,流速变得很慢,三四秒一滴。跑出来的峰都是这样:一个很低很宽的大峰。线性梯度太缓会不会导致峰变宽呢?梯度陡一些会不会改善峰形?

请问你的目标蛋白的等电点多少,你用的缓冲液的PH是多少,一般离子交换的ph和等电点相差一个ph
11楼2012-03-15 12:52:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-03-15 11:43:12:
平衡是要几倍柱体积的,是不没有平衡过来啊,确定上样前平衡液的ph是目的ph?

这个我知道,肯定已经充分平衡了的,虽然没用缓冲液平衡一夜。填料也肯定不会错,肯定是DEAE sep ff,不会犯这些错误的。
12楼2012-03-15 12:53:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-15 12:52:40:
请问你的目标蛋白的等电点多少,你用的缓冲液的PH是多少,一般离子交换的ph和等电点相差一个ph

文献中报道的这种酶的等电点从4点几到6点几不等,不同菌种产的酶是不太一样的,我也不清楚我的酶等电点多少。我开始用pH6.5的磷酸缓冲液,发现穿透峰有酶活,挂柱不牢,故改为pH8.0的Tris-HCl。
13楼2012-03-15 13:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

引用回帖:
13楼: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 13:02:42:
文献中报道的这种酶的等电点从4点几到6点几不等,不同菌种产的酶是不太一样的,我也不清楚我的酶等电点多少。我开始用pH6.5的磷酸缓冲液,发现穿透峰有酶活,挂柱不牢,故改为pH8.0的Tris-HCl。

先把等电点弄清楚了吧,这样的话你摸条件的时候也容易点
14楼2012-03-15 13:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-15 13:10:35:
先把等电点弄清楚了吧,这样的话你摸条件的时候也容易点

请问在酶尚未纯化出来之前,有啥办法能弄清它的等电点呢?
15楼2012-03-15 14:23:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狐狸尾巴

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
目的蛋白可能存在多种构型
16楼2012-03-15 14:51:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狐狸尾巴

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目的蛋白是不是发酵所得?
17楼2012-03-15 14:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 狐狸尾巴 at 2012-03-15 14:51:52:
目的蛋白是不是发酵所得?

目的蛋白是真菌胞内酶,样品为菌丝匀浆提取液经硫酸铵沉淀后所得。
18楼2012-03-15 14:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

感觉是填料的问题,换试试,要不2m氢氧化钠再生一下
19楼2012-03-15 15:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-03-15 15:01:24:
感觉是填料的问题,换试试,要不2m氢氧化钠再生一下

嗯,我每次过完柱子都用氢氧化钠处理的。如果真是填料坏了,那就必须换了。
20楼2012-03-15 15:15:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 amq7392 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +8 调剂的考研学生 2026-03-09 8/400 2026-03-15 22:14 by Winj1e
[考研] 材料专硕326求调剂 +4 墨煜姒莘 2026-03-15 4/200 2026-03-15 11:02 by dyw
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +3 清风问长安 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分,求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 0703,333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
信息提示
请填处理意见