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lihuan0525

金虫 (职业作家)

★ ★
telomerase: 金币+2, 谢谢你的热心应助 2012-03-17 15:41:04
引用回帖:
15楼: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 14:23:08:
请问在酶尚未纯化出来之前,有啥办法能弄清它的等电点呢?

这个我也没有做过,你从网上查查资料吧
21楼2012-03-15 18:41:05
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

★ ★
telomerase: 金币+2, 谢谢你的热心应助 2012-03-17 15:40:19
引用回帖:
20楼: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 15:15:45:
嗯,我每次过完柱子都用氢氧化钠处理的。如果真是填料坏了,那就必须换了。

要是这样,还真不好说因为什么,
也许是有蛋白在等电点,浓度高时有析出,在洗脱时析出导致堵塞
1m盐再生时要不就换个ph
22楼2012-03-15 19:14:52
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
22楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-03-15 19:14:52:
要是这样,还真不好说因为什么,
也许是有蛋白在等电点,浓度高时有析出,在洗脱时析出导致堵塞
1m盐再生时要不就换个ph

嗯,谢谢你的建议,我试一下吧。
23楼2012-03-16 09:12:38
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 09:40:14:
过一夜会消耗N升缓冲液啊,呵呵。“5%梯度洗脱”啥意思?

上样时应该注意电导变化,如果电导发生明显变化,说明你上的样品与缓冲液离子强度不同,最终导致蛋白挂不上住。“5%梯度洗脱“AKT”一共有三个泵,其中两个与洗脱有关的泵A,B.一般用A1上缓冲液,B1上洗脱液一般用(缓冲液+1M Nacl),5%梯度洗脱就是缓冲液加上5%B1的缓冲液洗脱,然后用10%洗脱,15%洗脱,以此类推。这样没洗脱一次就应该有个峰值。
24楼2012-03-16 10:12:31
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jylingg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
柱床的体积与上样量是一定有联系的,要充分平衡柱床,不能有气泡,收集时的滴速不能过快,还要进行酸碱平衡,蛋白才不会变性
25楼2012-03-16 10:14:05
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amq7392: 金币+1, 有帮助 2012-03-20 11:13:57
1、很明显,你的柱子没有装好,但即使这样也不至于出现你描述的问题;
2、你的梯度洗脱液描述的很模糊,但也不会出现你说的问题;
我觉得最有可能的是你的样品量太小,柱子太大了。最好检查下检测器有没有问题。
26楼2012-03-16 10:48:55
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zx6291

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白上样量过浓了,超过树脂的上载量了
27楼2012-03-16 13:32:07
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baodongq

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amq7392: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-03-20 11:14:25
本帖内容被屏蔽

28楼2012-03-16 17:00:15
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amq7392: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-08-19 15:23:12
你的柱子压的不实把,再一个就是你用1M Nacl洗脱时的流速多大?是不是流速大把柱料压塌了。你的样品是不是很脏啊;洗脱峰很宽,你可以用分步梯度洗脱:如50mM nacl、100mM nacl、分布洗脱,用线性梯度洗脱容易把峰托宽,在一个就是你测测你装的柱子的柱效是不是很好。
29楼2013-08-19 10:49:52
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