应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教离子交换柱纯化蛋白的问题
52/1返回列表
查看: 3869  |  回复: 28
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 求教离子交换柱纯化蛋白的问题

本人用DEAE Sepharose FF纯化一种酶，柱子为1.6X30cm，柱床高约20cm，上样缓冲液20mM Tris-HCl，用0—0.5M NaCl梯度洗脱，流速约2ml/min。问题是：在整个梯度洗脱过程中仅出现一个很大的峰，峰高A280不到0.02，但特别宽，三四个小时才出完，经检测酶活，我的目标产物就存在于整个峰中。我重复了两三次，都是这种情况，请问这是怎么回事？是我装柱有问题还是洗脱条件有问题？还有就是，当梯度完后，高盐洗脱时（1M NaCl），柱床高度下降明显，有两三个厘米，这是怎么回事呢？谢谢各位！

[ Last edited by amq7392 on 2012-3-13 at 19:24 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-03-13 19:20:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 08:52:28:
重装过几次，都是这种情况，柱床塌陷，流速变得很慢，三四秒一滴。跑出来的峰都是这样：一个很低很宽的大峰。线性梯度太缓会不会导致峰变宽呢？梯度陡一些会不会改善峰形？

请问你的目标蛋白的等电点多少，你用的缓冲液的PH是多少，一般离子交换的ph和等电点相差一个ph
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2012-03-15 12:52:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 29 个回答

120548382

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是缓冲体系的PH的问题，你调一下缓冲体系的PH改变，重新尝试一下，应该就能挂柱了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-03-14 21:32:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amq7392: 金币+1, ★有帮助 2012-03-20 10:56:08
高盐洗脱时（1M NaCl），柱床高度下降明显，有两三个厘米，这是怎么回事呢？  感觉是你的柱子没有装好，重装下柱子试试吧，如果还不行的话，在考虑别的问题。在有上样的流速可以减小点。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-03-14 22:30:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)
确定一下是否是DEAE sep ff
听着怎么像A50之流。
DEAE曾用2m氢氧化钠处理过，包括乙醇、酸我均用过在线清洗，也没见有床体积变化。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-03-15 08:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 29 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:13 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-12 11:25 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-12 11:14 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 10:03 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 11/550 2026-11-12 09:57 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 09:46 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:43 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 3/150 2026-11-12 08:26 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 07:09 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:14 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 6/300 2026-11-12 05:41 by 9fOTqj074tIg
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 9/450 2026-11-12 04:57 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭