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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-28a原核不能表达目的蛋白
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农科院523

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by pwj at 2012-03-14 21:50:12
试试TB培养基，以前我也遇到同样问题，换了TB培养基就好了！希望你能成功

请问一下 TB培养基 摇菌的时候 也加抗生素吗
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whatafuckingwork
11楼2012-06-12 21:47:00
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ddtao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议用Polycysteine-dendritic poly(His,Arg)1:5试一试
http://www.novel-polylysine.com/main/home/htm.php?nowmenuid=2
huiyisu@126.com
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12楼2016-04-02 12:52:56
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潜度幻想

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhiqiang5070 at 2012-03-14 17:49:04
我跟你一样，也是用的PET28a，不过我用的菌是BL21。
1.你先到上游看看，是不是载体构建的问题；菌p，提质粒酶切，测序看看。
2.上游没问题的话，改变诱导条件试试，T7lac启动子用IPTG1mM诱导6小时看看；
3你的菌 ...

如果表达的蛋白没有活性怎么办啊

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13楼2016-04-03 15:26:26
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任我逍遥江南

铜虫 (正式写手)
哈哈，这个我做多了，首先要确定你的克隆是没问题的。关于表达，每个蛋白的表达环境还是有一定差距的，诱导条件有一定的差距，主要是诱导前的细菌OD,一般在细菌的对数生长期，有的蛋白在OD 600为0.6时诱导效果最好，有的在1.0时诱导最好，看你是什么条件，

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14楼2016-04-03 16:08:28
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任我逍遥江南

铜虫 (正式写手)
为什么是2012年的帖子？

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15楼2016-04-03 16:10:05
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

先分析载体和片段有没有连接成功，感受态有无问题，这些都没有问题的话，如果稀有密码子太多，就会影响到表达，可以分析下稀有密码子，稀有密码子多的话，可以买含有稀有密码子的菌株；如果是有毒性，就需要换可表达毒性蛋白的表达菌株。
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16楼2016-04-04 19:15:02
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
低温诱导！！！16℃吧，或者没有16摄氏度摇床就用25度。

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17楼2016-04-04 21:39:09
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松五学子

新虫 (初入文坛)
您好，我现在也遇到和您同样的问题，请问您的问题是如何解决的呐，谢谢！
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18楼2017-11-09 16:56:10
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