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农科院523

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by pwj at 2012-03-14 21:50:12
试试TB培养基,以前我也遇到同样问题,换了TB培养基就好了!希望你能成功

请问一下 TB培养基 摇菌的时候 也加抗生素吗
whatafuckingwork
11楼2012-06-12 21:47:00
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ddtao

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

建议用Polycysteine-dendritic poly(His,Arg)1:5试一试
http://www.novel-polylysine.com/main/home/htm.php?nowmenuid=2
huiyisu@126.com
12楼2016-04-02 12:52:56
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潜度幻想

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhiqiang5070 at 2012-03-14 17:49:04
我跟你一样,也是用的PET28a,不过我用的菌是BL21。
1.你先到上游看看,是不是载体构建的问题;菌p,提质粒酶切,测序看看。
2.上游没问题的话,改变诱导条件试试,T7lac启动子用IPTG1mM诱导6小时看看;
3你的菌 ...

如果表达的蛋白没有活性怎么办啊

发自小木虫IOS客户端
13楼2016-04-03 15:26:26
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任我逍遥江南

铜虫 (正式写手)

哈哈,这个我做多了,首先要确定你的克隆是没问题的。关于表达,每个蛋白的表达环境还是有一定差距的,诱导条件有一定的差距,主要是诱导前的细菌OD,一般在细菌的对数生长期,有的蛋白在OD 600为0.6时诱导效果最好,有的在1.0时诱导最好,看你是什么条件,

发自小木虫Android客户端
14楼2016-04-03 16:08:28
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任我逍遥江南

铜虫 (正式写手)

15楼2016-04-03 16:10:05
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

先分析载体和片段有没有连接成功,感受态有无问题,这些都没有问题的话,如果稀有密码子太多,就会影响到表达,可以分析下稀有密码子,稀有密码子多的话,可以买含有稀有密码子的菌株;如果是有毒性,就需要换可表达毒性蛋白的表达菌株。
16楼2016-04-04 19:15:02
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

低温诱导!!!16℃吧,或者没有16摄氏度摇床就用25度。

发自小木虫Android客户端
17楼2016-04-04 21:39:09
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松五学子

新虫 (初入文坛)

您好,我现在也遇到和您同样的问题,请问您的问题是如何解决的呐,谢谢!
18楼2017-11-09 16:56:10
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