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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » 请教各位一个关于EDC/NHS偶联的问题
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xd19881206

新虫 (小有名气)

[求助] 请教各位一个关于EDC/NHS偶联的问题 已有1人参与

我现在正在做颗粒表面带有羧基的微球偶联蛋白的实验，我想请教大家一个问题，羧基使用EDC/NHS来活化是在酸性环境中反应的，而偶联反应是在弱碱性条件下进行的，是不是要分两步进行呢？
还有个问题，能得到NHS-ester活性酯中间体吗？另外怎么检测这种结构呢？谢谢！
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1楼 2012-03-05 16:13:24
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晴朗的影子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by xd19881206 at 2012-03-07 10:41:51:
我又想了下是不是可以这样理解：在水溶液中NHS-ester生成与水解反应存在竞争关系，当达到一定平衡后就比较稳定了，在有氨基存在的条件下，氨基与活性酯生成酰胺键结构。对不对？

应该差不多是这样。不过NHS-ester稳定性不够好，我看文献中一般是活化0.5-1.5h，然后直接加入氨
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18楼2012-03-07 11:08:13
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bioalchem

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-03-06 08:46:48
个人以为2步更好，因为蛋白本身既有羧基也有氨基；关于PH问题，不一定酸性，至少PH=7.4的缓冲液中可以反应，只要检验结果符合预定目标就行。欢迎指正
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2楼2012-03-06 08:43:36
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-03-06 21:12:49
酸性环境中反应，pH=6左右，
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3楼2012-03-06 11:06:20
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晴朗的影子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-03-06 21:13:02
分两步比较好，活化时pH5-6之间吧，可以得到NHS活化的中间体，试试红外应该就能表征
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xd19881206
4楼2012-03-06 11:45:23
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