应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 关于药物体外二相代谢研究
131/2返回列表12下一页
查看: 4924  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shjdyb

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于药物体外二相代谢研究

求助：我现在在做一种药物的体外代谢研究，体内以证明其代谢产物是葡糖醛酸结合和硫酸结合代谢产物，现在在做体外实验，一直做不出代谢现象，请求大家帮助。

我的孵育体系是100μL：按文献方法葡糖醛酸体系：微粒体0.1mg/mL, 5mM Mgcl2, 0.03%曲拉通，0.5mM药物，孵育5min后，3mMUDPGA启动反应，孵育60min.
硫酸体系是使用的肝胞质液，其他条件同上（未加曲拉通），PAPS启动反应。
     实验非常着急，谢谢大家的帮助。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

药代分布 零碎集

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-02 20:24:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mc0326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2012-03-11 00:08:32
有几个可能的问题，你试一下
首先是做葡萄糖醛酸结合实验需要加穿孔剂阿拉霉素，否则底物很难和UGT接触，影响实验效果。sigma可买，内附说明书。你们加的那个曲拉通不知道是不是这么作用。
其次是微粒体蛋白浓度是不是有些低，我们用的是0.5 mg/mL的
第三，仅用氯化镁就可以了吗，我们用的是PBS
最后，建议一下，可以先用容易发生葡萄糖醛酸结合的化合物验证一下实验体系，我们用的是7-羟基香豆素
希望能帮到你
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-03-06 15:35:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

shjdyb

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by mc0326 at 2012-03-06 15:35:28:
有几个可能的问题，你试一下
首先是做葡萄糖醛酸结合实验需要加穿孔剂阿拉霉素，否则底物很难和UGT接触，影响实验效果。sigma可买，内附说明书。你们加的那个曲拉通不知道是不是这么作用。
其次是微粒体蛋白浓度 ...

谢谢你的回答，我的微粒体浓度写错了是1mg/ml,总的体系是PBS,只是另外加了氯化镁，关于穿孔剂从文献上查的有用曲拉通的，我也做了阳性对照了用的对乙酰氨基酚，也没有代谢。微粒体活性应该没问题，做有些药物的一相代谢做出结果了。想问一下，你们做体外代谢实验时有没有发现哪个步骤的影响因素比较大啊。试了一个多月了都没有结果，真的很着急，非常感谢你的帮助。
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-10 23:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mc0326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
shjdyb(金币+1): ★★★很有帮助 2012-03-11 10:17:22
我们之前也试过对乙酰氨基酚做阳性对照，发现它保留时间特别早，不太好测定，结果不是很明显，才换了7-羟基香豆素。还有，我记得对乙酰氨基酚应该是要先I相代谢加羟基后才能再加葡萄糖醛酸吧，需要加NADPH的
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-10 23:25:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shjdyb

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by mc0326 at 2012-03-10 23:25:11:
我们之前也试过对乙酰氨基酚做阳性对照，发现它保留时间特别早，不太好测定，结果不是很明显，才换了7-羟基香豆素。还有，我记得对乙酰氨基酚应该是要先I相代谢加羟基后才能再加葡萄糖醛酸吧，需要加NADPH的

我们这没有7-羟基香豆素，我看文献有用雌二醇的，我用雌二醇试试
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-11 10:19:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luodi911

铁虫 (小有名气)
微粒体浓度可能太低了，因为你没法保证你做的活性好不好
以前我做的时候，就是把微粒体提取之后立刻加底物之类的孵育，先不测浓度，浓度测定和孵育同时进行，最后测得大概有3～4mg/ml的样子。估计还是微粒体活性不好吧
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-12 10:25:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shjdyb

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by luodi911 at 2012-03-12 10:25:17:
微粒体浓度可能太低了，因为你没法保证你做的活性好不好
以前我做的时候，就是把微粒体提取之后立刻加底物之类的孵育，先不测浓度，浓度测定和孵育同时进行，最后测得大概有3～4mg/ml的样子。估计还是微粒体活性 ...

我是买的国产的微粒体，用的1mg/mL的浓度，觉得浓度够到了啊，我这几天做了底物雌二醇的硫酸结合代谢，大概只代谢了15%左右，从你做实验的经验看，活性怎么样啊？非常感谢你的帮助，现在真的很焦急。
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-13 20:14:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shjdyb

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by mc0326 at 2012-03-10 23:25:11:
我们之前也试过对乙酰氨基酚做阳性对照，发现它保留时间特别早，不太好测定，结果不是很明显，才换了7-羟基香豆素。还有，我记得对乙酰氨基酚应该是要先I相代谢加羟基后才能再加葡萄糖醛酸吧，需要加NADPH的

我用的1mg/mL的微粒体孵育了底物雌二醇，大概，代谢了15%作用，跟你的实验比，我的微粒体活性怎么样啊？？
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-13 20:16:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猴茜茜

新虫 (小有名气)
后来你找到原因了吗？我现在也在做微粒体二相反应，感觉没有代谢，实验条件也和你差不多。。。急！
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-12 12:55:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shjdyb

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小猴茜茜 at 2012-04-12 12:55:42:
后来你找到原因了吗？我现在也在做微粒体二相反应，感觉没有代谢，实验条件也和你差不多。。。急！

我的实验刚开始用的S9不代谢，后来换成微粒体就代谢了，你的现在怎么样了？我现在又遇到新问题了，就是二相代谢酶动力学研究，我的药不出现饱和现象是怎么回事，你做这方面了吗?能解释一下吗？
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-02 21:12:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shjdyb 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +12 kkkl_v 2026-08-19 12/600 2026-08-19 22:12 by 小布吉岛
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +54 医学老男孩 2026-08-13 121/6050 2026-08-19 20:28 by 医学老男孩
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cHIDTWCTtLlG 2026-08-19 6/300 2026-08-19 18:52 by oCMhZAsgNFoO
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭