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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 关于药物体外二相代谢研究
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shjdyb

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于药物体外二相代谢研究

求助：我现在在做一种药物的体外代谢研究，体内以证明其代谢产物是葡糖醛酸结合和硫酸结合代谢产物，现在在做体外实验，一直做不出代谢现象，请求大家帮助。

我的孵育体系是100μL：按文献方法葡糖醛酸体系：微粒体0.1mg/mL, 5mM Mgcl2, 0.03%曲拉通，0.5mM药物，孵育5min后，3mMUDPGA启动反应，孵育60min.
硫酸体系是使用的肝胞质液，其他条件同上（未加曲拉通），PAPS启动反应。
     实验非常着急，谢谢大家的帮助。
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1楼 2012-03-02 20:24:07
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shjdyb

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by luodi911 at 2012-03-12 10:25:17:
微粒体浓度可能太低了，因为你没法保证你做的活性好不好
以前我做的时候，就是把微粒体提取之后立刻加底物之类的孵育，先不测浓度，浓度测定和孵育同时进行，最后测得大概有3～4mg/ml的样子。估计还是微粒体活性 ...

我是买的国产的微粒体，用的1mg/mL的浓度，觉得浓度够到了啊，我这几天做了底物雌二醇的硫酸结合代谢，大概只代谢了15%左右，从你做实验的经验看，活性怎么样啊？非常感谢你的帮助，现在真的很焦急。
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7楼2012-03-13 20:14:16
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mc0326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2012-03-11 00:08:32
有几个可能的问题，你试一下
首先是做葡萄糖醛酸结合实验需要加穿孔剂阿拉霉素，否则底物很难和UGT接触，影响实验效果。sigma可买，内附说明书。你们加的那个曲拉通不知道是不是这么作用。
其次是微粒体蛋白浓度是不是有些低，我们用的是0.5 mg/mL的
第三，仅用氯化镁就可以了吗，我们用的是PBS
最后，建议一下，可以先用容易发生葡萄糖醛酸结合的化合物验证一下实验体系，我们用的是7-羟基香豆素
希望能帮到你
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2楼2012-03-06 15:35:28
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shjdyb

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by mc0326 at 2012-03-06 15:35:28:
有几个可能的问题，你试一下
首先是做葡萄糖醛酸结合实验需要加穿孔剂阿拉霉素，否则底物很难和UGT接触，影响实验效果。sigma可买，内附说明书。你们加的那个曲拉通不知道是不是这么作用。
其次是微粒体蛋白浓度 ...

谢谢你的回答，我的微粒体浓度写错了是1mg/ml,总的体系是PBS,只是另外加了氯化镁，关于穿孔剂从文献上查的有用曲拉通的，我也做了阳性对照了用的对乙酰氨基酚，也没有代谢。微粒体活性应该没问题，做有些药物的一相代谢做出结果了。想问一下，你们做体外代谢实验时有没有发现哪个步骤的影响因素比较大啊。试了一个多月了都没有结果，真的很着急，非常感谢你的帮助。
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3楼2012-03-10 23:08:05
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mc0326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
shjdyb(金币+1): ★★★很有帮助 2012-03-11 10:17:22
我们之前也试过对乙酰氨基酚做阳性对照，发现它保留时间特别早，不太好测定，结果不是很明显，才换了7-羟基香豆素。还有，我记得对乙酰氨基酚应该是要先I相代谢加羟基后才能再加葡萄糖醛酸吧，需要加NADPH的
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4楼2012-03-10 23:25:11
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