24小时热门版块排行榜    

查看: 4439  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

shjdyb

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于药物体外二相代谢研究

求助:我现在在做一种药物的体外代谢研究,体内以证明其代谢产物是葡糖醛酸结合和硫酸结合代谢产物,现在在做体外实验,一直做不出代谢现象,请求大家帮助。

我的孵育体系是100μL:按文献方法葡糖醛酸体系:微粒体0.1mg/mL, 5mM Mgcl2, 0.03%曲拉通,0.5mM药物,孵育5min后,3mMUDPGA启动反应,孵育60min.
硫酸体系是使用的肝胞质液,其他条件同上(未加曲拉通),PAPS启动反应。
     实验非常着急,谢谢大家的帮助。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

药代分布 零碎集

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luodi911

铁虫 (小有名气)

微粒体浓度可能太低了,因为你没法保证你做的活性好不好
以前我做的时候,就是把微粒体提取之后立刻加底物之类的孵育,先不测浓度,浓度测定和孵育同时进行,最后测得大概有3~4mg/ml的样子。估计还是微粒体活性不好吧
6楼2012-03-12 10:25:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

mc0326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
karl2100(金币+1): 谢谢! 2012-03-11 00:08:32
有几个可能的问题,你试一下
首先是做葡萄糖醛酸结合实验需要加穿孔剂阿拉霉素,否则底物很难和UGT接触,影响实验效果。sigma可买,内附说明书。你们加的那个曲拉通不知道是不是这么作用。
其次是微粒体蛋白浓度是不是有些低,我们用的是0.5 mg/mL的
第三,仅用氯化镁就可以了吗,我们用的是PBS
最后,建议一下,可以先用容易发生葡萄糖醛酸结合的化合物验证一下实验体系,我们用的是7-羟基香豆素
希望能帮到你
2楼2012-03-06 15:35:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shjdyb

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by mc0326 at 2012-03-06 15:35:28:
有几个可能的问题,你试一下
首先是做葡萄糖醛酸结合实验需要加穿孔剂阿拉霉素,否则底物很难和UGT接触,影响实验效果。sigma可买,内附说明书。你们加的那个曲拉通不知道是不是这么作用。
其次是微粒体蛋白浓度 ...

谢谢你的回答,我的微粒体浓度写错了是1mg/ml,总的体系是PBS,只是另外加了氯化镁,关于穿孔剂从文献上查的有用曲拉通的,我也做了阳性对照了用的对乙酰氨基酚,也没有代谢。微粒体活性应该没问题,做有些药物的一相代谢做出结果了。想问一下,你们做体外代谢实验时有没有发现哪个步骤的影响因素比较大啊。试了一个多月了都没有结果,真的很着急,非常感谢你的帮助。
3楼2012-03-10 23:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mc0326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


shjdyb(金币+1): ★★★很有帮助 2012-03-11 10:17:22
我们之前也试过对乙酰氨基酚做阳性对照,发现它保留时间特别早,不太好测定,结果不是很明显,才换了7-羟基香豆素。还有,我记得对乙酰氨基酚应该是要先I相代谢加羟基后才能再加葡萄糖醛酸吧,需要加NADPH的
4楼2012-03-10 23:25:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265求调剂 +4 梁梁校校 2026-03-19 4/200 2026-03-20 00:03 by 23Postgrad
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +3 lemonzzn 2026-03-17 3/150 2026-03-19 23:58 by 23Postgrad
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +12 曦熙兮 2026-03-15 12/600 2026-03-19 19:42 by maocaozhuxi
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 281求调剂(0805) +9 烟汐忆海 2026-03-16 19/950 2026-03-19 11:42 by laoshidan
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 274求调剂 +6 S.H1 2026-03-18 6/300 2026-03-19 09:34 by 花店相见
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭! 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 303求调剂 +4 睿08 2026-03-17 6/300 2026-03-18 11:01 by Iveryant
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
信息提示
请填处理意见