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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白浓度测定的经验公式 标题要长啊 才能引起注意
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白浓度测定的经验公式 标题要长啊 才能引起注意

在网上看到过一个蛋白浓度测定的经验公式，具体是这样的：


280nm和260nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收，在280nm处的吸收比蛋白质强10倍（每克），但核酸在260nm处的吸收更强，其吸收高峰在260nm附近。核酸260nm处的消光系数是280nm处的2倍，而蛋白质则相反，280nm紫外吸收值大于260nm的吸收值。通常：
纯蛋白质的光吸收比值：A280/A260  = 1.8
纯核酸的光吸收比值： A280/A260 = 0.5
含有核酸的蛋白质溶液，可分别测定其A280和A260，由此吸收差值，用下面的经验公式，即可算出蛋白质的浓度。
蛋白质浓度(mg/ml)=1.45×A280－0.74×A260
此经验公式是通过一系列已知不同浓度比例的蛋白质（酵母烯醇化酶）和核酸（酵母核酸）的混合液所测定的数据来建立的。


我想问下有没有人用过这个公式测浓度，用的话发在文章里人家承不承认这种方法啊？我测的是植物蛋白

[ Last edited by zzqbaidu on 2012-3-1 at 14:34 ]
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1楼 2012-03-01 11:33:26
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)
自己顶个
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2楼2012-03-01 18:53:01
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zzqbaidu(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-02 08:56:12
这是直接测量法，也有用的，但没有用BCA或者Bradford法测量的准确，所以只能做粗定量，不太准，有条件的话还是要用Bradford/BCA等方法，做实验麽，还是要可靠数据
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3楼2012-03-01 19:15:10
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zzqbaidu(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-02 08:56:23
自己实验定量吧   或用 nanodrop
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4楼2012-03-01 20:31:12
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zzqbaidu(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-02 08:56:31
紫外吸收法测蛋白含量，干扰因素多，误差很大，蛋白氨基酸组成不同，e值相差也很大，还是采取其他方法如福林酚法
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5楼2012-03-02 08:21:19
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by jiaxinfish at 2012-03-01 19:15:10:
这是直接测量法，也有用的，但没有用BCA或者Bradford法测量的准确，所以只能做粗定量，不太准，有条件的话还是要用Bradford/BCA等方法，做实验麽，还是要可靠数据

奥，谢谢  ，不过我每次用Bradford法时线性很难达到两个9，您是加了染液多久后测得？
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6楼2012-03-02 09:07:34
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by linyingjia at 2012-03-01 20:31:12:
自己实验定量吧   或用 nanodrop

谢谢！
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7楼2012-03-02 09:07:55
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-03-02 08:21:19:
紫外吸收法测蛋白含量，干扰因素多，误差很大，蛋白氨基酸组成不同，e值相差也很大，还是采取其他方法如福林酚法

悲剧啊  木有条件啊
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8楼2012-03-02 09:08:23
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晚香玉

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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进口的BCA稍微准一点，微量的话用Mic BCA。。。标准曲线能达到3个9
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9楼2012-03-02 10:25:38
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
其他方法没怎么接触，现在用的是nanodrop 2000
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10楼2012-03-02 10:51:15
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