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寂寞妖瞳

金虫 (正式写手)

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[求助] 乳酸的HPLC分析求助

目前的实验需要检测乳酸和2-氯丙酸这两种物质，查阅文献，有一个HPLC的条件如下：PRP-1反柱相，检测波长：210 nm，流动相：乙腈：水（磷酸缓冲液）= 20：80( pH= 2.0)，柱温：室温，流量：1.0 mL/min，进样量: 20 μL，2－氯丙酸的保留时间4.5 min，乳酸的保留时间是2.9 min。
现在，我用的是Eclipse XDB-C18 柱子，但是出峰情况很差。最大的问题是在流动相上，请教高人（2）流动相：乙腈：水（磷酸缓冲液）= 20：80( pH= 2.0)，这里面磷酸缓冲液是指磷酸和磷酸氢二钠配置的缓冲溶液吗？（2）pH=2是指整个流动相还是仅仅指缓冲液呢？（3）PRP-1反柱相和Eclipse XDB-C18 柱子的分离效果相差很大吗？
另外，如果有高手在HPLC上检测过乳酸，请告诉我条件哦，恳请赐教，不胜感激哦。

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1楼 2012-02-29 21:44:52

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痴夷子皮

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老痞

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 寂寞妖瞳 at 2012-03-01 10:49:00:
1.磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的缓冲体系pH是达不到2的，钾盐和盐酸，或者磷酸和磷酸氢二钠两种体系的pH可以达到2.
2.pH这个问题，我以前理解错误了，我以前是整个流动相的pH为2，现在准备去把缓冲液配成pH值为2试试 ...

对于1有点误解了。磷酸二氢钠、磷酸氢二钠的缓冲体系，指的是磷酸盐缓冲液，以磷酸调pH至适宜，不是指磷酸二氢钠-磷酸氢二钠体系。
缓冲盐浓度约0.01M即可，以5%左右的磷酸调pH