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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 乳酸的HPLC分析求助
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寂寞妖瞳

金虫 (正式写手)

[求助] 乳酸的HPLC分析求助

目前的实验需要检测乳酸和2-氯丙酸这两种物质，查阅文献，有一个HPLC的条件如下：PRP-1反柱相，检测波长：210 nm，流动相：乙腈：水（磷酸缓冲液）= 20：80( pH= 2.0)，柱温：室温，流量：1.0 mL/min，进样量: 20 μL，2－氯丙酸的保留时间4.5 min，乳酸的保留时间是2.9 min。
    现在，我用的是Eclipse XDB-C18 柱子，但是出峰情况很差。最大的问题是在流动相上，请教高人（2）流动相：乙腈：水（磷酸缓冲液）= 20：80( pH= 2.0)，这里面磷酸缓冲液是指磷酸和磷酸氢二钠配置的缓冲溶液吗？（2）pH=2是指整个流动相还是仅仅指缓冲液呢？（3）PRP-1反柱相和Eclipse XDB-C18 柱子的分离效果相差很大吗？
    另外，如果有高手在HPLC上检测过乳酸，请告诉我条件哦，恳请赐教，不胜感激哦。
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1楼 2012-02-29 21:44:52
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主
引用回帖:
7楼: Originally posted by 寂寞妖瞳 at 2012-03-01 10:49:00:
1.磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的缓冲体系pH是达不到2的，钾盐和盐酸，或者磷酸和磷酸氢二钠两种体系的pH可以达到2.
2.pH这个问题，我以前理解错误了，我以前是整个流动相的pH为2，现在准备去把缓冲液配成pH值为2试试 ...

对于1有点误解了。磷酸二氢钠、磷酸氢二钠的缓冲体系，指的是磷酸盐缓冲液，以磷酸调pH至适宜，不是指磷酸二氢钠-磷酸氢二钠体系。
缓冲盐浓度约0.01M即可，以5%左右的磷酸调pH
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守候在风中的宁静。
9楼2012-03-01 10:54:53
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逆流11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo(金币+2): 鼓励新虫应助~ 欢迎常来分析版交流 ^^ 2012-02-29 23:06:40
缓冲液是用磷酸和磷酸氢二钠配置的，这里应该有浓度的，基本上是毫摩尔每升的，pH是缓冲液的，但是貌似2有点低对柱子影响不好，具体柱子类型你查查看，都适用于什么的。希望回答对你有帮助，我也是新手。
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有梦好甜蜜!
2楼2012-02-29 22:07:08
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo(金币+1): 感谢专业解答 ^^ 2012-02-29 23:06:56
1、磷酸缓冲液 在没有说明的前提下，可能是磷酸二氢钠、磷酸氢二钠或钾盐。
2、pH=2 指的是流动相中的水相pH（即缓冲盐），流动相pH不宜太低。
3、分离效果，主要影响因素是分析方法（流动相组分、梯度、pH、流速、柱温等）
4、调整流动相，调整分析方法试试看。
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守候在风中的宁静。
3楼2012-02-29 22:46:23
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zhrmghgmn

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo(金币+1): 感谢专业指导 ^^ 欢迎常来 2012-03-01 18:58:13
1、这里 pH= 2.0，是指水的 pH= 2.0，直接在水里面加几滴磷酸把pH调到
    就可以了，不需要磷酸氢二钠。
2、出峰情况很差是不是指峰形很差？如果是，可能是流动相中水的pH值没
   有到2。
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4楼2012-03-01 08:05:18
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