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寂寞妖瞳

金虫 (正式写手)

[求助] 乳酸的HPLC分析求助

目前的实验需要检测乳酸和2-氯丙酸这两种物质,查阅文献,有一个HPLC的条件如下:PRP-1反柱相,检测波长:210 nm,流动相:乙腈:水(磷酸缓冲液)= 20:80( pH= 2.0),柱温:室温,流量:1.0 mL/min,进样量: 20 μL,2-氯丙酸的保留时间4.5 min,乳酸的保留时间是2.9 min。
    现在,我用的是Eclipse XDB-C18 柱子,但是出峰情况很差。最大的问题是在流动相上,请教高人(2)流动相:乙腈:水(磷酸缓冲液)= 20:80( pH= 2.0),这里面磷酸缓冲液是指磷酸和磷酸氢二钠配置的缓冲溶液吗?(2)pH=2是指整个流动相还是仅仅指缓冲液呢?(3)PRP-1反柱相和Eclipse XDB-C18 柱子的分离效果相差很大吗?
    另外,如果有高手在HPLC上检测过乳酸,请告诉我条件哦,恳请赐教,不胜感激哦。
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寂寞妖瞳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 逆流11 at 2012-02-29 22:07:08:
缓冲液是用磷酸和磷酸氢二钠配置的,这里应该有浓度的,基本上是毫摩尔每升的,pH是缓冲液的,但是貌似2有点低对柱子影响不好,具体柱子类型你查查看,都适用于什么的。希望回答对你有帮助,我也是新手。

首先谢谢你的回答。Eclipse XDB-C18柱子的pH是在2-8之间的,所以我看文献上写的磷酸缓冲液,直接用磷酸配置PH=2.5的,当时是为了保护柱子。但是峰型很差,乳酸出双峰。文献上出峰很好的。
6楼2012-03-01 10:40:19
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寂寞妖瞳

金虫 (正式写手)

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: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-02-29 22:46:23:
1、磷酸缓冲液 在没有说明的前提下,可能是磷酸二氢钠、磷酸氢二钠或钾盐。
2、pH=2 指的是流动相中的水相pH(即缓冲盐),流动相pH不宜太低。
3、分离效果,主要影响因素是分析方法(流动相组分、梯度、pH、流 ...

1.磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的缓冲体系pH是达不到2的,钾盐和盐酸,或者磷酸和磷酸氢二钠两种体系的pH可以达到2.
2.pH这个问题,我以前理解错误了,我以前是整个流动相的pH为2,现在准备去把缓冲液配成pH值为2试试。
3.目前从这些因素来看,我和文献上最大的区别是pH,呵呵,但愿待会能分开。谢谢你的解惑。
7楼2012-03-01 10:49:00
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寂寞妖瞳

金虫 (正式写手)

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5楼: Originally posted by zhrmghgmn at 2012-03-01 08:46:00:
对上面回复的补充:
1、这里 pH= 2.0,是指水的 pH= 2.0,直接在水里面加几滴磷酸把pH调到
    就可以了,不需要磷酸氢二钠,或者配制20mmol/L磷酸氢二钠溶液,它
   的pH= 2.0,不需要磷酸。试试看。
2、出峰 ...

峰型差不是指拖尾等哦,而是出现双峰,不能分离的双峰,两个峰的大小都差不多,所以很郁闷。谢谢你的回答呢。
8楼2012-03-01 10:50:28
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金虫 (正式写手)

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9楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-03-01 10:54:53:
对于1有点误解了。磷酸二氢钠、磷酸氢二钠的缓冲体系,指的是磷酸盐缓冲液,以磷酸调pH至适宜,不是指磷酸二氢钠-磷酸氢二钠体系。
缓冲盐浓度约0.01M即可,以5%左右的磷酸调pH

那我这个pH=2的磷酸缓冲液到底如何配置哦?1、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠的缓冲体系,以磷酸调pH至适宜。2、磷酸和磷酸氢二钠直接配置。两种方法到底有没有本质上的区别哦。查询分析化学的书,上面也找不到答案。
10楼2012-03-01 11:19:30
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寂寞妖瞳

金虫 (正式写手)

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11楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-03-01 11:27:30:
调pH的方法,滴加磷酸,可用pH计控制。
直接用磷酸和磷酸盐配,你知道加多少量吗?而且称量误差,不能保证每次配置的时候加入的量都完全一样,致使pH有偏差,还是得做用酸碱微调pH。

也就是说,我先配置0.1mol/L磷酸氢二钠和0.1mol/L磷酸二氢钠,这种缓冲溶液的pH为7.21,然后在pH计下用磷酸调节pH等于2,是这样把?
    另外还查询到一个方法是 磷酸盐缓冲液(pH2.0),甲液:取磷酸16.6ml,加水至1000ml,摇匀。乙液:取磷酸氢二钠71.63g,加水使溶解成1000ml。取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合,摇匀,即得。不过这个磷酸得用移液管量取了。
      这两种方法都可以吗?还是前者更佳?
12楼2012-03-01 12:43:35
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金虫 (正式写手)

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14楼: Originally posted by zhrmghgmn at 2012-03-01 14:15:48:
现在明确告诉你 乙腈:水(磷酸缓冲液)= 20:80( pH= 2.0),水就用20mmol/L磷酸氢二钠溶液。
出现双峰的原因可能是样品溶解不完全,用流动相溶解样品比较好。

水就用20mmol/L磷酸氢二钠溶液,这个pH是达不到2的啊,是要加磷酸调节吗?因为我配置0.1M的磷酸氢二钠pH是9.样品的溶解还蛮好的,因为乳酸和水或者乙腈都是互溶的
16楼2012-03-01 17:20:05
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