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寂寞妖瞳

金虫 (正式写手)

[求助] 乳酸的HPLC分析求助

目前的实验需要检测乳酸和2-氯丙酸这两种物质,查阅文献,有一个HPLC的条件如下:PRP-1反柱相,检测波长:210 nm,流动相:乙腈:水(磷酸缓冲液)= 20:80( pH= 2.0),柱温:室温,流量:1.0 mL/min,进样量: 20 μL,2-氯丙酸的保留时间4.5 min,乳酸的保留时间是2.9 min。
    现在,我用的是Eclipse XDB-C18 柱子,但是出峰情况很差。最大的问题是在流动相上,请教高人(2)流动相:乙腈:水(磷酸缓冲液)= 20:80( pH= 2.0),这里面磷酸缓冲液是指磷酸和磷酸氢二钠配置的缓冲溶液吗?(2)pH=2是指整个流动相还是仅仅指缓冲液呢?(3)PRP-1反柱相和Eclipse XDB-C18 柱子的分离效果相差很大吗?
    另外,如果有高手在HPLC上检测过乳酸,请告诉我条件哦,恳请赐教,不胜感激哦。
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
soundhorizo(金币+1): 感谢专业解答 ^^ 2012-02-29 23:06:56
1、磷酸缓冲液 在没有说明的前提下,可能是磷酸二氢钠、磷酸氢二钠或钾盐。
2、pH=2 指的是流动相中的水相pH(即缓冲盐),流动相pH不宜太低。
3、分离效果,主要影响因素是分析方法(流动相组分、梯度、pH、流速、柱温等)
4、调整流动相,调整分析方法试试看。
守候在风中的宁静。
3楼2012-02-29 22:46:23
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逆流11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
soundhorizo(金币+2): 鼓励新虫应助~ 欢迎常来分析版交流 ^^ 2012-02-29 23:06:40
缓冲液是用磷酸和磷酸氢二钠配置的,这里应该有浓度的,基本上是毫摩尔每升的,pH是缓冲液的,但是貌似2有点低对柱子影响不好,具体柱子类型你查查看,都适用于什么的。希望回答对你有帮助,我也是新手。
有梦好甜蜜!
2楼2012-02-29 22:07:08
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zhrmghgmn

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
soundhorizo(金币+1): 感谢专业指导 ^^ 欢迎常来 2012-03-01 18:58:13
1、这里 pH= 2.0,是指水的 pH= 2.0,直接在水里面加几滴磷酸把pH调到
    就可以了,不需要磷酸氢二钠。
2、出峰情况很差是不是指峰形很差?如果是,可能是流动相中水的pH值没
   有到2。
4楼2012-03-01 08:05:18
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zhrmghgmn

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

对上面回复的补充:
1、这里 pH= 2.0,是指水的 pH= 2.0,直接在水里面加几滴磷酸把pH调到
    就可以了,不需要磷酸氢二钠,或者配制20mmol/L磷酸氢二钠溶液,它
   的pH= 2.0,不需要磷酸。试试看。
2、出峰情况很差是不是指峰形很差?如果是,可能是流动相中水的pH值没
   有到2。
5楼2012-03-01 08:46:00
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