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寂寞妖瞳

金虫 (正式写手)

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[求助] 乳酸的HPLC分析求助

目前的实验需要检测乳酸和2-氯丙酸这两种物质，查阅文献，有一个HPLC的条件如下：PRP-1反柱相，检测波长：210 nm，流动相：乙腈：水（磷酸缓冲液）= 20：80( pH= 2.0)，柱温：室温，流量：1.0 mL/min，进样量: 20 μL，2－氯丙酸的保留时间4.5 min，乳酸的保留时间是2.9 min。
现在，我用的是Eclipse XDB-C18 柱子，但是出峰情况很差。最大的问题是在流动相上，请教高人（2）流动相：乙腈：水（磷酸缓冲液）= 20：80( pH= 2.0)，这里面磷酸缓冲液是指磷酸和磷酸氢二钠配置的缓冲溶液吗？（2）pH=2是指整个流动相还是仅仅指缓冲液呢？（3）PRP-1反柱相和Eclipse XDB-C18 柱子的分离效果相差很大吗？
另外，如果有高手在HPLC上检测过乳酸，请告诉我条件哦，恳请赐教，不胜感激哦。

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1楼2012-02-29 21:44:52

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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

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soundhorizo(金币+2): 感谢专业指导 ^^ 欢迎常来 2012-03-01 18:58:50

引用回帖:

12楼: Originally posted by 寂寞妖瞳 at 2012-03-01 12:43:35:
也就是说，我先配置0.1mol/L磷酸氢二钠和0.1mol/L磷酸二氢钠，这种缓冲溶液的pH为7.21，然后在pH计下用磷酸调节pH等于2，是这样把？
另外还查询到一个方法是　磷酸盐缓冲液(pH2.0)，甲液:取磷酸16.6ml，加水 ...

都可以。
配置0.1mol/L磷酸氢二钠和0.1mol/L磷酸二氢钠，这种缓冲溶液的pH为7.21。——是使用一种盐（氢二或二氢），不是两种哦。

我偏向于第一种，首先，你现在还在摸条件，pH=2只是暂定的，要是以后pH有所调整，譬如pH改为4更加合适。那么第二种方法配制就不行了。应用第一种，在合理的pH范围内，无论pH如何变化，都可以通过磷酸调控。