【答案】应助回帖

11楼2012-03-02 15:19:49

海阔天空8158

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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wanhscn(金币+3, 专家考核): 鼓励热心应助！ 2012-03-05 20:59:24
小丹木木(金币+5): 多加点币币哦 2012-03-06 10:47:41

基因组DNA的话，首先要确定你设计引物时，是根据基因组DNA设计的，这样才能排除内含子的干扰。
另外，基因组DNA的条带长，非常可能出现错配。可以测序扩增出的条带，看看扩增的条带跟你的目的产物有没有关系。
如果证明是错配的话，建议查文献找现成引物。实在没有的话，可能要重新设计引物。
如果你的目的片段在mRNA上的话，可以通过primer blast设计，效果好，错配少。

祝实验顺利。

天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物。

12楼2012-03-03 07:16:15

fwks3518

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

引物不特异造成的，请重新设计引物

13楼2012-03-03 09:10:35

玉面小达摩

银虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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增加引物长度到27bp左右，退火温度高一点，怎家特异性的方法无非怎家引物长度，提高退火温度，再就是缩短一下退货时间，采用45s或30s退火

对方归还借款

14楼2012-03-04 19:11:32

欧朵拉

铁虫 (小有名气)

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楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-03-01 22:43:17:
非特异扩增，能不能将退火温度升上去？

做了退火温度优化，没有变化···

做自己喜欢的事情，心态决定一切~

15楼2012-03-05 20:43:17

欧朵拉

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引用回帖:

楼: Originally posted by 海阔天空8158 at 2012-03-03 07:16:15:
基因组DNA的话，首先要确定你设计引物时，是根据基因组DNA设计的，这样才能排除内含子的干扰。
另外，基因组DNA的条带长，非常可能出现错配。可以测序扩增出的条带，看看扩增的条带跟你的目的产物有没有关系。
...

谢谢，我再试试~

做自己喜欢的事情，心态决定一切~

16楼2012-03-05 20:44:31