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zhhard

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
blast一下 看看引物有没有问题
11楼2012-03-02 15:19:49
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海阔天空8158

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wanhscn(金币+3, 专家考核): 鼓励热心应助! 2012-03-05 20:59:24
小丹木木(金币+5): 多加点币币哦 2012-03-06 10:47:41
基因组DNA的话,首先要确定你设计引物时,是根据基因组DNA设计的,这样才能排除内含子的干扰。
另外,基因组DNA的条带长,非常可能出现错配。可以测序扩增出的条带,看看扩增的条带跟你的目的产物有没有关系。
如果证明是错配的话,建议查文献找现成引物。实在没有的话,可能要重新设计引物。
如果你的目的片段在mRNA上的话,可以通过primer blast设计,效果好,错配少。

祝实验顺利。
天行健,君子以自强不息;地势坤,君子以厚德载物。
12楼2012-03-03 07:16:15
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fwks3518

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物不特异造成的,请重新设计引物
13楼2012-03-03 09:10:35
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玉面小达摩

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
增加引物长度到27bp左右,退火温度高一点,怎家特异性的方法无非怎家引物长度,提高退火温度,再就是缩短一下退货时间,采用45s或30s退火
对方归还借款
14楼2012-03-04 19:11:32
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by blackrose8089 at 2012-03-01 22:43:17:
非特异扩增,能不能将退火温度升上去?

做了退火温度优化,没有变化···
做自己喜欢的事情,心态决定一切~
15楼2012-03-05 20:43:17
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 海阔天空8158 at 2012-03-03 07:16:15:
基因组DNA的话,首先要确定你设计引物时,是根据基因组DNA设计的,这样才能排除内含子的干扰。
另外,基因组DNA的条带长,非常可能出现错配。可以测序扩增出的条带,看看扩增的条带跟你的目的产物有没有关系。
...

谢谢,我再试试~
做自己喜欢的事情,心态决定一切~
16楼2012-03-05 20:44:31
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