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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR产物?

求救各位大师~PCR引物设计后产物大小显示100bp左右,但是P出来的条带都是500bp左右,这是什么原因?如何优化?做了退火温度优化,没有太大差别····
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PCR技术

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做自己喜欢的事情,心态决定一切~
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by eagle00768 at 2012-03-01 11:06:58:
同意,可能是引物不好,如果你的带比较弱的话,应该属于非特异性扩增。二者,假如你的模版是gDNA,而你的两条引物范围内有内含子,那么就可能扩出比预想的要大的片段。你设计引物的时候是用基因全序列设计的还是 ...

我的模板是基因组DNA,P出来的条带特别亮···
做自己喜欢的事情,心态决定一切~
5楼2012-03-01 22:18:49
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by dingke_s at 2012-03-01 09:55:58:
你的模板是基因组DNA还是cDNA?有没有内含子?
可能你P出来是非特异性条带,可能要重新设计引物。

我的模板是基因组DNA····
做自己喜欢的事情,心态决定一切~
6楼2012-03-01 22:19:22
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by blackrose8089 at 2012-03-01 22:43:17:
非特异扩增,能不能将退火温度升上去?

做了退火温度优化,没有变化···
做自己喜欢的事情,心态决定一切~
15楼2012-03-05 20:43:17
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 海阔天空8158 at 2012-03-03 07:16:15:
基因组DNA的话,首先要确定你设计引物时,是根据基因组DNA设计的,这样才能排除内含子的干扰。
另外,基因组DNA的条带长,非常可能出现错配。可以测序扩增出的条带,看看扩增的条带跟你的目的产物有没有关系。
...

谢谢,我再试试~
做自己喜欢的事情,心态决定一切~
16楼2012-03-05 20:44:31
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