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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物？
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR产物？

求救各位大师~PCR引物设计后产物大小显示100bp左右，但是P出来的条带都是500bp左右，这是什么原因？如何优化？做了退火温度优化，没有太大差别····
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做自己喜欢的事情，心态决定一切~
1楼2012-02-29 21:25:46
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玉面小达摩

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
增加引物长度到27bp左右，退火温度高一点，怎家特异性的方法无非怎家引物长度，提高退火温度，再就是缩短一下退货时间，采用45s或30s退火
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对方归还借款
14楼2012-03-04 19:11:32
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dingke_s

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 这是很有可能的，可以把引物和模板BLAST 2012-03-06 10:46:37
你的模板是基因组DNA还是cDNA?有没有内含子？
可能你P出来是非特异性条带，可能要重新设计引物。
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2楼2012-03-01 09:55:58
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
P这么小的片段不是很好做，查查是不是引物设计问题，有错配...
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3楼2012-03-01 09:57:34
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eagle00768

木虫 (小有名气)
★
小丹木木(金币+1): 鼓励 2012-03-03 11:52:10
引用回帖:
2楼: Originally posted by dingke_s at 2012-03-01 09:55:58:
你的模板是基因组DNA还是cDNA?有没有内含子？
可能你P出来是非特异性条带，可能要重新设计引物。

同意，可能是引物不好，如果你的带比较弱的话，应该属于非特异性扩增。二者，假如你的模版是gDNA，而你的两条引物范围内有内含子，那么就可能扩出比预想的要大的片段。你设计引物的时候是用基因全序列设计的还是仅仅是编码区的序列来设计的呢？
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4楼2012-03-01 11:06:58
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