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keennes

木虫 (著名写手)

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[交流] 研究细胞信号转导通路，建立细胞系，是否一定要敲出细胞内源性蛋白分子？已有2人参与

本人从事细胞内信号转导途径的研究，需要建立一个新细胞系，用EGFP标记某一蛋白分子，以监测该蛋白涉及到的信号途径的信号传递情况。我的建议是：敲出细胞内源性的该蛋白，通过表达构建载体在细胞表达EGFP与该蛋白的融合蛋白，达到精确定量测定信号强弱的目的。但是导师和其他人不同意，认为没有必要。我也就按照他们的意见来做，但我给导师明确说了保留我的意见。后来出了问题，信号果然很弱；增加几倍的激动剂，仍然很弱。但他们仍然认为敲出内源性蛋白没有必要。我很迷茫啊，请牛人给个建议。谢谢了先。

[ 来自科研家族生物医药家族 ]

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独上高楼，望尽天涯路……

1楼2012-02-28 12:34:02

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keennes

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by chenliang_0513 at 2012-02-29 18:12:13:
如果测信号的强弱，不是一般测荧光双报告基因吗？
如果要做蛋白质的相互作用结合力，就用BICO-3000测亲和力常数？
具体你的实验是要干嘛我也不清楚，单是我做了不是siRNA的实验，还有双报告的实验，一般都是差距 ...

在细胞水平高通量的筛选这个信号通路的激动剂。