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xiaoping1986

银虫 (著名写手)

[求助] 发色底物法检测方法

我在网上查了一下发色底物发检测的原理是，首先人工合成可以被待测凝血活酶催化裂解的化合物，且化合物连接上产色物质，在检测过程中产色物质可被解离下来，使被检样品中出现颜色变化，根据颜色变化可推算出被检凝血活酶的活性。产色物质一般选用连接对硝基苯胺（PNA）。游离的PNA呈黄色，其测定波长选用405nm。具体检测方法即可采用动态法、也可采用终点法。动态法即是连续记录样品的吸光度变化，算出单位时间吸光度的变化量，并以每分钟吸光度的变化来报告结果。终点法即是指在活性酶同产色物质作用一段时间后，加入乙酸终止反应，检测此段时间内吸光度的变化，进而推算出待检酶的活性。但是还是不太清楚操作的具体步骤是什么，比如怎样动态法中记录连续变化吸光度的变化时怎样记录数据，怎样计算结果的，有没有公式什么的？再有这种方法的标准曲线是怎样测定？比如文献中说加入0.1mL底物和酶37度下保温5min,在405nm下测定，底物有S-2288，S222等，请高手告知一下这个是怎样操作的，具体操作步骤是什么，非常感谢！
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1楼 2012-02-23 21:27:49
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