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1楼2012-02-19 19:33:31

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bosipopona

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 73
帖子: 41
在线: 10.3小时
虫号: 1004884
注册: 2010-04-24
专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
吴德光(金币+10): ★★★很有帮助谢谢帮助 2012-02-22 14:50:05

用PCR扩增出来的不带A碱基的平末端的两段DNA片段能否直接用T4连接酶连接起来？
能，fermentas 的T4 ligase说明书上有，温度和时间同黏性末端连接时会有些不一样。
如果是带有A碱基的有尾末端的两段DNA片段能否通过T4连接酶补平后再连接起来？
可以。
第二、大连宝生物的solution 1连接酶能否连接平末端DNA？
这个具体忘了，网上下个说明书看看就行。我用过各种连接酶T4，solution I ,东洋纺的，个人以为不管用哪一种，主要连接时间够了其实差不多，关键在于连接之前的工作和连接体系中质粒和DNA的摩尔比要合适。

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bosipopona

2楼2012-02-21 12:02:25

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ytetyio09

新虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
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红花: 10
帖子: 554
在线: 195.1小时
虫号: 772091
注册: 2009-05-16
专业: 生物防治

可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256

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3楼2014-03-25 10:01:31

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