【答案】应助回帖

事在人为/人为事在

11楼2012-02-19 19:52:23

qhyy

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楼: Originally posted by fjamigo at 2012-02-18 21:31:31:
你所说的极性大，是指的正丁醇相吗？如果用反相柱子的话，那一般甲醇和水的梯度洗脱是可以的。先洗下来的是极性弱的，然后用TLC分析看看有效果没，不耽误时间。一般细分的话还要再过一遍柱子，如果还是不行就要用 ...

不是，是乙酸乙酯部的大极性组分，用TLC跑板，点靠的很近，不是很好分，额分的结构分子量又差不多，凝胶效果不好，所以想上上反相

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12楼2012-02-19 19:54:19

qhyy

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楼: Originally posted by 乙酰水杨酸 at 2012-02-18 23:10:08:
液相摸条件吧，不过前提是你柱子的填料类型和你高效液相的柱子要一致或者类似。不然真正分离时候分离效果相差很大，另外，做反相之前，最好先试试样品在甲醇-水里的溶解度，实在很差的话不建议用反相。

请教下，如果用液相摸条件的话，是怎么样操作的，是从甲醇冲起还是从水冲起？怎么样用液相的方式是比较好的一个摸条件手段。

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13楼2012-02-19 20:00:33

乙酰水杨酸

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【答案】应助回帖

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13楼: Originally posted by qhyy at 2012-02-19 20:00:33:
请教下，如果用液相摸条件的话，是怎么样操作的，是从甲醇冲起还是从水冲起？怎么样用液相的方式是比较好的一个摸条件手段。

首先你的液相最好是DAD检测器，我自己操作首先就是甲醇-水系统梯度洗脱，10%甲醇-100%甲醇30min，看看峰型和分离效果，如果峰型不好，就考虑加酸，加三乙胺或者缓冲盐之类的改善，如果峰型好，就针对分离效果优化，假设15min左右这段峰杂，分离不好，你大概计算下15min时的甲醇比例，第二针你就用你计算得到的甲醇比例等度洗脱，这时候分离度肯定改善的。要优化哪一段你就这样去做，最后得到的这些等度洗脱的比例就是你上柱子分离的条件了。

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浮世绘卷拓不懂濯清涟不妖

14楼2012-02-19 23:25:01

liupengp02

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11楼: Originally posted by qhyy at 2012-02-19 19:52:23:
嗯，我觉得也只能这样了，直接上柱，逐渐递增比例

对，试试吧

你不懂我，我不怪你

15楼2012-02-20 19:48:24

qhyy

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楼: Originally posted by 乙酰水杨酸 at 2012-02-19 23:25:01:
首先你的液相最好是DAD检测器，我自己操作首先就是甲醇-水系统梯度洗脱，10%甲醇-100%甲醇30min，看看峰型和分离效果，如果峰型不好，就考虑加酸，加三乙胺或者缓冲盐之类的改善，如果峰型好，就针对分离效果优化 ...

谢谢乙酰水杨酸的建议，令我受益匪浅，在下还有几个问题想请教：
1、在今晚看到你的建议时，我已经上了高效液相，不过因为不太会用，我首先用的是90%的甲醇冲柱子，想把所有的点都冲出来，这种方式不知何时否。
2、还有我在冲的过程中出现了这样一个现象，就是在前10分钟我大部分峰都出来了，但是在26分钟时有一个孤立的峰存在，两者相差了10多分钟，这种情况下我应该怎么做，是加大极性把10分钟前的点峰分开还是怎么做？有没有可能把那26分钟处的峰在制备液相上压到出不来，而其他峰都分开，最后换甲醇把那峰冲出来？
3、是不是在做分析液相时，摸好条件后要把出峰时间，冲洗比例都记下来？然后在制备时在那个时间注意接峰？
还请指点一二，本人初次接触液相，很是不懂，请不吝赐教

事在人为/人为事在

16楼2012-02-24 00:48:17