24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 3552  |  回复: 16
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议你延迟洗脱时间,适当增加洗脱液中咪唑的浓度,
11楼2012-03-16 11:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdxianwei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你得具体操作是怎样的,你是不是做了一个柱上复性?
如果是柱上复性,那你的样品挂在层析柱上后,需要一个复性过程,让你得蛋白折叠到天然构象,一般这个过程是通过缓慢降低尿素的浓度来实现,时间大于12小时,分子量越大,复性时间一般稍长,因为空间结构越复杂。
如果你上样后直接洗脱,是起不到复性效果的,这样会使蛋白瞬间折叠成杂乱状态,正确结构很少。
建议上样后走个尿素梯度6M-0M,其他成分与上样缓冲液一样
小木虫
12楼2012-03-16 12:53:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brown437

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by linatracy at 2012-03-15 16:09:27:
洗涤的时候,应该做一个梯度洗涤!我现在在纯化的蛋白,用10mM,20mM,40mM,80mM......400mM,到时候可以看出后面洗脱的蛋白很纯,自己选择一个合适的洗涤液。我到300mM的洗脱液就洗脱的很干净,一遍就基本干净了 ...

那是不是最后的蛋白量就少了很多?我是在250nM条件下洗了多次,最后一次目的蛋白是比较纯了,但是量太少了,后来觉得是不是洗脱时间也不易太长,不知道你的洗脱时间是怎么控制的?
13楼2012-04-28 16:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linatracy

金虫 (小有名气)

你做梯度洗涤之后,跑电泳之后,看看在那个浓度的是目的蛋白是不会洗下来的,选择一个最大浓度做洗涤液,后面在选择一个合适的浓度在做洗脱液,就可以了!之后再接洗脱下来的蛋白,跑电泳,我是用的2ml柱子,洗三遍差不多就可以了,后面在洗的就不要了,量太低了。
14楼2012-04-28 17:10:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

其实可以做一些前处理,比如做一步盐析,除掉一部分杂蛋白之后再来纯化!那样可能效果会好一些
15楼2012-12-01 16:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M110899

金虫 (正式写手)

l楼主有没有蛋白纯化试剂盒的中文说明书?能否方便发我一份?感激不尽
16楼2014-03-20 15:49:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

引用回帖:
9楼: Originally posted by 18853850850 at 2012-02-16 09:11:53
蛋白小好纯化一点吧,我的一个30KD的蛋白就纯化的不错...

楼主方便额告知下我吗,我也在纯化个35kd左右的 蛋白,总是有杂蛋白啊
Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
17楼2014-03-28 14:59:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 18853850850 的主题更新
信息提示
请填处理意见