24小时热门版块排行榜    

查看: 3157  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


[交流] 双酶切问题

双酶切质粒载体,酶切完全后得到两个片段:约5000bp和100bp,通常回收PCR不容易检测到100bp的条带,这样就不容易区分大片段是双酶切后产物的还是单酶切产物。当然,采用高浓度凝胶可以检测出100bp的条带,不知道还有没有其他简单易行的方法进行区分呢,欢迎指教。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


引用回帖:
: Originally posted by brightfuture01 at 2012-02-07 13:01:21:
常用的一些高效率的限制性内切酶如BamHI、EcoRI等酶切几个小时就完全酶切了,你所提到的这个问题就不存在。如果是低效率的限制性内切酶,最好过夜酶切。

最好能切胶回收5000bp的酶切产物,毕竟你的另一段有100 ...

现在最关键的问题是5000bp附近片段是已经完全双酶切还是只是单酶切的产物,我想请教一下有没有简单的验证方法。
5楼2012-02-07 13:44:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)



joan198108(金币+1):谢谢参与
跑PAGE胶
胶回收自连

酶切载体是为了克隆吧,直接往下做,再做一个自连对照看看
2楼2012-02-07 12:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★ ★
joan198108(金币+1):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励交流 2012-02-07 13:20:36
常用的一些高效率的限制性内切酶如BamHI、EcoRI等酶切几个小时就完全酶切了,你所提到的这个问题就不存在。如果是低效率的限制性内切酶,最好过夜酶切。

最好能切胶回收5000bp的酶切产物,毕竟你的另一段有100bp。

前些年的时候国产试剂盒的质量比较差,虽说能回收100以上的DNA片段,但是基本上回收不到100bp。现在国产试剂盒的质量也比较高了,100bp的片段过PCR柱纯化试剂盒残留太多,连接很容易重新连回到载体上。‘
3楼2012-02-07 13:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


引用回帖:
: Originally posted by 香菱儿 at 2012-02-07 12:49:58:
跑PAGE胶
胶回收自连

酶切载体是为了克隆吧,直接往下做,再做一个自连对照看看

自连是个不错的方法,比较直观,就是操作复杂了些。谢谢指教!
4楼2012-02-07 13:21:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 5/250 2026-08-28 12:41 by Tide man
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +12 晴天加油 2026-08-26 13/650 2026-08-28 11:32 by skyjudy
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 基金不中,共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
请填处理意见