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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

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[交流] 双酶切问题

双酶切质粒载体，酶切完全后得到两个片段：约5000bp和100bp，通常回收PCR不容易检测到100bp的条带，这样就不容易区分大片段是双酶切后产物的还是单酶切产物。当然，采用高浓度凝胶可以检测出100bp的条带，不知道还有没有其他简单易行的方法进行区分呢，欢迎指教。

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1楼 2012-02-07 10:54:59

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

★ ★ ★
joan198108(金币+1):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励交流 2012-02-07 13:20:36

常用的一些高效率的限制性内切酶如BamHI、EcoRI等酶切几个小时就完全酶切了，你所提到的这个问题就不存在。如果是低效率的限制性内切酶，最好过夜酶切。

最好能切胶回收5000bp的酶切产物，毕竟你的另一段有100bp。

前些年的时候国产试剂盒的质量比较差，虽说能回收100以上的DNA片段，但是基本上回收不到100bp。现在国产试剂盒的质量也比较高了，100bp的片段过PCR柱纯化试剂盒残留太多，连接很容易重新连回到载体上。‘