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1289622木虫 (正式写手)
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色谱柱柱压高的问题
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色谱柱C18（5μm，4.6×150mm），有预柱，纯乙腈柱压50，纯甲醇柱压170，甲醇：水=70:30柱压350，仪器通道很正常，压力显示也很正常，没接柱子压力显示都很小。 1、我的柱子是不是堵了？如果堵了，怎么用乙腈柱压还比较低呢？什么原因？怎么办？ 2、网上有的说可以将柱子以低流速反冲，这样可以吗？如果可以，流速多大，反冲多久（时间久了对柱子是不是不好啊），用什么样的流动相？ 3、基线怎么总是向下漂？基线漂是什么原因？怎么处理？ 4、柱子可以用NaOH溶液冲吗？ph在那个范围合适？估计是溶于碱性溶液的药物进液相后ph变化导致药物洗出（可能性大吗？）。 [ Last edited by 1289622 on 2012-1-15 at 12:27 ] |
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【答案】应助回帖
1289622(金币+20, 博学EPI+1): 2012-02-15 15:36:31
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1、如果不加预柱的话，有是做生物基质，是很容易堵塞柱头的；乙腈黏度小，冲洗HPLC柱子时反映出柱压就低！ 2、用什么冲取决于是什么物质造成的堵塞，如果是盐的话，可以用90%水甲醇溶液冲，建议先正冲；如果不行再反冲，你用的柱子粗，要用0.5ml/min以上流速冲，1-2个小时候，发现柱压平稳了， 就差不多了。 但要注意反冲后要正着再冲回来，就是至少90%的乙腈再多冲洗二十分钟以上后再进行测试！ 3、若你走等度，监测220nm和254nm，肯定会看到220nm下的基线有点往下漂的，但是只要254nm下正常即可； 如果是MS的检测器，依仪器型号，响应在5次方到6次方都是正常的！ 4、NaOH溶液几乎没有用过！一般柱子的耐酸能力比耐碱强！ 看柱子的说明书，一般范围是2-9的柱子就属于较宽范围了！碱性药物你进样量少的话，对柱子也不会有太大影响！主要是流动相的影响！ |
4楼2012-01-21 10:01:22
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【答案】应助回帖
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1、柱子有没有堵还不好说，因为不同的设备具体压力也不一样。压力是纯乙腈<纯甲醇<10%甲醇水溶液的。 2、关于反冲柱子，色谱柱一般都是有注明方向的，反向冲洗是会影响柱子使用寿命的。不过不同厂家的产品之间存在差异，好的柱子，不建议反向冲洗。最好咨询厂家后再作处理。 3、LZ用的是紫外-可见光分光光度计吗？这个设备在使用时必须有一个预热过程，否则它也会造成基线漂移。如果分光光度计没问题且柱子平衡了很长时间后，基线仍有漂移，那很可能是柱温没控制好。 4、柱子是绝对不可以用NaOH溶液冲的，ph的话，一般是2-8吧，碱性太强会把柱子上的硅胶都溶掉。如果你是用强碱性溶液溶解样品进的样，那是可能造成出峰太快的。建议使用流动相溶解样品（或者洗脱强度比流动相小的有机溶剂水溶液），这样也可以减少样品在柱子中造成堵塞的几率。 PS：lz可以看看一些企业（岛津、waters、安捷伦）的学员手册，网上很多。里面有比较系统的讲解，对刚刚开始接触HPLC的人还是很有帮助的。  |
6楼2012-01-30 19:02:45
jinaipushy
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7楼2012-02-05 21:41:16
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