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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 培养皿杂菌去除
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fxb66

木虫 (正式写手)

[求助] 培养皿杂菌去除

首先感谢各位的关注。本人初涉微生物领域，采用平板计数法进行水稻纹枯菌培养。第一次培养成功（和他人论文上纹枯菌特征对照），后多次试验均培养失败。水稻纹枯菌28度大概培养72小时才会长成菌落，现在是在30个小时左右培养皿内就会出现一种半液态粘稠状的杂菌，图片附在最后，请各位指点下：
1.这是什么杂菌，如何有效杜绝！
  对超净工作台、培养箱都进行了消毒，操作过程非常谨慎，自认为没有什么失误！培养皿及其他用到的操作工具都是121度高温蒸汽灭30分钟，仍然出现上述问题（所用培养基为最普通的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)固体培养基）。
2.培养过程中，导致杂菌出现最有可能的环节是哪个？
  敬请各位高人指点！非常感谢！！！
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1楼2012-01-12 10:35:00
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杨磊305

木虫 (正式写手)

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fxb66(金币+1): ★★★很有帮助 2012-01-14 08:51:02
划线培养，取单菌落
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2楼2012-01-12 10:48:28
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wsysohubaby

银虫 (初入文坛)

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zhang8826857(金币+3): 鼓励交流 2012-01-12 15:52:31
fxb66(金币+3): ★★★很有帮助 2012-01-14 08:51:26
原菌种被污染，需分离纯化。继续培养，待水稻纹枯菌长出后，进行纯化啊。
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3楼2012-01-12 10:58:48
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zys1256

金虫 (初入文坛)

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zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-01-12 15:52:38
fxb66(金币+3): ★★★很有帮助 2012-01-14 08:50:18
从你说的看，如果操作没有什么问题的话，那只能是原菌种被污染了。
从菌落和生长时间看，很可能是细菌，可以加一些抗生素抑制细菌生长，比如链霉素什么的，我们以前从水稻发病的组织中分离纹枯病就是用的链霉素抑制细菌的。
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4楼2012-01-12 13:07:12
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痴客

木虫 (正式写手)

吃货250

【答案】应助回帖

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fxb66(金币+4): ★★★很有帮助 2012-01-14 08:48:51
水稻纹枯菌有没有做过纯种验证？把你长出来的菌落划线接种到新鲜培养基上，注意用划线，别涂布，看长出的菌落有几种形态
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因为这个世界上这么多的狼，我这只牧羊犬只好放弃我的温顺，向着这个世界放出最耀眼的光。
5楼2012-01-12 13:09:04
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zier1011

木虫 (著名写手)

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zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-01-12 15:52:45
fxb66(金币+4): ★★★很有帮助 2012-01-14 08:49:28
1.做不接种的空培养基平板对照——如果也有杂菌生长，考虑操作过程、所用器皿以及培养基染菌；如果孔培养基平板没有杂菌生长，则可以基本确定是菌种污染杂菌，考虑分离纯化。
2.如果你几次培养染得杂菌相同，重点考虑菌种污染。
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花还香香的
6楼2012-01-12 13:36:50
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wjf008

金虫 (正式写手)

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zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-01-12 15:52:51
fxb66(金币+4): ★★★很有帮助 2012-01-14 08:49:10
首先，平板上是看不到你要选择的菌的，如果是经过培养的，那么的种子可能在上一代已经是被杂菌污染了；其次，对于这种菌种的纯培养，添加氯霉素是治标不治本的，抑制生长不是杀死，染菌问题得不到解决，但是可以辅助确定你原代中是否有你想要的菌株，后续仍然需要分离。分离的方法是三区划线，建议找参考书稍微看一下，不好说清楚，其实很简单。另外，培养皿尽量干灭，有水的话容易染菌。
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7楼2012-01-12 13:49:36
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njuzhangxin

铁杆木虫 (小有名气)

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fxb66(金币+1): ★★★很有帮助 2012-01-14 08:50:46
这明显是细菌，选抗生素加到培养基里。
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8楼2012-01-13 14:10:50
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fxb66

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by zys1256 at 2012-01-12 13:07:12:
从你说的看，如果操作没有什么问题的话，那只能是原菌种被污染了。
从菌落和生长时间看，很可能是细菌，可以加一些抗生素抑制细菌生长，比如链霉素什么的，我们以前从水稻发病的组织中分离纹枯病就是用的链霉素抑 ...

朋友，能帮下忙吗!有水稻纹枯菌培养出来的菌丝图片吗，发几张好吗！我的邮箱fxb9510@yahoo.cn,非常感谢！苦恼，身边完全没有人指导啊，张出来的菌是不是都不知道啊！我现在长出的菌丝是乳白色的，菌核大概80小时左右是黑中泛绿色，不知道对不对啊？能指点下吗？
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9楼2012-01-14 16:27:26
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njuzhangxin

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by fxb66 at 2012-01-14 16:27:26:
朋友，能帮下忙吗!有水稻纹枯菌培养出来的菌丝图片吗，发几张好吗！我的邮箱fxb9510@yahoo.cn,非常感谢！苦恼，身边完全没有人指导啊，张出来的菌是不是都不知道啊！我现在长出的菌丝是乳白色的， ...

Thanatephorus cucumeris (Frank) Donk.称瓜亡革菌，属担子菌亚门真菌。无性态Rhizoctonia solani Kühn称立枯丝核菌，属半知菌亚门真菌。致病的主要菌丝融合群是AG-1占95%以上，其次是AG-4和AG-Bb(双核线核菌)。从菌丝生长速度和菌核开始产生扎需时间来看，R.solani AG-1和AG-4较快，而双核丝核菌AG-Bb较慢。在PDA上23℃条件下AG-1形成菌核需时3天。菌核深褐色圆形或不规则形，较紧密。菌落色泽浅褐至深褐色；AG-4菌落浅灰褐色，菌核形成需3-4天，褐色，不规则形，较扁平，疏松，相互聚集；AG-Bb菌落灰褐色，菌核形成需3-4天，灰褐色，圆形或近圆形，大小较一致，一般生于气生菌丝丛中。
选真菌通用引物，跑个pcr，测序，比对一下，就知道是不是纹枯菌了。
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fxb66
10楼2012-01-15 05:40:33
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