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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切鉴定图
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linatracy

金虫 (小有名气)

[交流] 酶切鉴定图 已有8人参与

大家帮忙看看，我这酶切鉴定的图，带特别淡，怎么样才可以使带变的亮呢？

Mark 为D15000的，后面两个都是酶切鉴定的

再注明一下，我跑28b的质粒的时候带就特别淡，之后做的连接，你们觉得是不是和我的质粒量少有关系呢？还有这样子的连接产物对表达量有没有关系？谢谢各位同仁了。

[ Last edited by linatracy on 2012-1-5 at 12:17 ]
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脱水拂空

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1楼 2012-01-04 11:50:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★
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wanhscn(金币+3, 专家考核): good！whs 2012-01-04 20:33:39
上样量可以加大点。如果是全部都拿来上样的，那酶切的DNA就应该用多一点了。
酶切前可以粗略计算下你的DNA浓度有多少，然后根据片段长度估计下酶切之后的条带分别有多少ng，之后调整酶切的DNA量。EB染色的话10ng就可以看到条带，但建议你保证每条带都在50ng以上，这样的条带就不会淡了。

举个例子：100ng的4kb的质粒，完全酶切之后，一条带是3kb，另一条是1kb，那它们的量就分别是75gn和25ng。这样子的话1 kb的带会比较弱。所以你应该切至少200ng的质粒。
不过也不是多多益善，太多的质粒，会酶切不完全甚至切不动。而且质粒本身因为不同构型就有2、3条带，会干扰结果。
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2楼2012-01-04 12:32:22
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普通回帖

lw19850128

银虫 (小有名气)
★ ★
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小丹木木(金币+1): 鼓励回帖 2012-01-04 15:40:48
染色剂用的什么？如果是EB或goldview1的话 建议提高点样量
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3楼2012-01-04 14:24:03
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
★ ★ ★ ★
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wanhscn(金币+1): 也是个方法！ 2012-01-05 11:28:51
wanhscn(金币+2): 追加奖励！ 2012-01-05 11:29:22
可以PS，带就亮了。。
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不孝有三，读博为大！
4楼2012-01-04 18:22:13
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)
★
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送鲜花一朵
你切的量少 多且量上样量再大些图就很好看啦
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5楼2012-01-04 20:00:34
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fanfenggui

金虫 (正式写手)
★
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加大上样量，调节图片对比度，多加点儿EB等
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爱由心起！
6楼2012-01-05 00:11:28
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
★ ★
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西瓜(金币+1): 有理！ 2012-01-06 18:50:56
看看你用的是几孔的梳子，相同的上样量点样孔小的比较清楚~~
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7楼2012-01-05 09:26:53
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通缉要饭

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
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wanhscn(金币+2): 也行！ 2012-01-06 01:09:12
和你面对一样的问题，我一般重新提质粒，用高浓度的质粒酶切
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8楼2012-01-05 18:48:12
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linatracy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 通缉要饭 at 2012-01-05 18:48:12:
和你面对一样的问题，我一般重新提质粒，用高浓度的质粒酶切

你效果怎么样？
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9楼2012-01-06 00:13:31
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韩锋红岩

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
增加酶切前产物的浓度：PCR延伸时间长一点，循环次数多一点，最重要的是要摸准最适合退火温度，可以做个温度梯度试试。
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啊啊
10楼2012-01-06 09:24:46
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