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linatracy金虫 (小有名气)
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[交流]
酶切鉴定图 已有8人参与
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大家帮忙看看，我这酶切鉴定的图，带特别淡，怎么样才可以使带变的亮呢？ Mark 为D15000的，后面两个都是酶切鉴定的 再注明一下，我跑28b的质粒的时候带就特别淡，之后做的连接，你们觉得是不是和我的质粒量少有关系呢？还有这样子的连接产物对表达量有没有关系？谢谢各位同仁了。 [ Last edited by linatracy on 2012-1-5 at 12:17 ] |
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wanhscn(金币+3, 专家考核): good！whs 2012-01-04 20:33:39
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wanhscn(金币+3, 专家考核): good！whs 2012-01-04 20:33:39
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上样量可以加大点。如果是全部都拿来上样的，那酶切的DNA就应该用多一点了。 酶切前可以粗略计算下你的DNA浓度有多少，然后根据片段长度估计下酶切之后的条带分别有多少ng，之后调整酶切的DNA量。EB染色的话10ng就可以看到条带，但建议你保证每条带都在50ng以上，这样的条带就不会淡了。 举个例子：100ng的4kb的质粒，完全酶切之后，一条带是3kb，另一条是1kb，那它们的量就分别是75gn和25ng。这样子的话1 kb的带会比较弱。所以你应该切至少200ng的质粒。 不过也不是多多益善，太多的质粒，会酶切不完全甚至切不动。而且质粒本身因为不同构型就有2、3条带，会干扰结果。 |
2楼2012-01-04 12:32:22
lw19850128
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3楼2012-01-04 14:24:03
yidaqunyan
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wanhscn(金币+1): 也是个方法！ 2012-01-05 11:28:51
wanhscn(金币+2): 追加奖励！ 2012-01-05 11:29:22
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wanhscn(金币+1): 也是个方法！ 2012-01-05 11:28:51
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| 可以PS，带就亮了。。 |
4楼2012-01-04 18:22:13
5楼2012-01-04 20:00:34
fanfenggui
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